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实时荧光PCR试剂盒的使用注意事项概述

发布时间:2022-11-15      点击次数:37
  实时荧光PCR试剂盒,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时监控反应过程。随着PCR反应的进行,反应产物不断累积,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一次荧光强度信号,这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,结合相应的软件对产物进行分析,可以得到荧光扩增曲线,计算待测样品初始模版的量。实时荧光定量PCR技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃,运用该项技术,可以对DNA、RNA样品进行相对定量、定量和定性分析。
  实时荧光PCR试剂盒概述:
  1.是采用SYBRGreenI嵌合荧光法进行RealTimePCR的试剂。产品中含有RealTimePCR反应的适浓度SYBRGreenI,进行实验时,PCR反应液的配制十分方便简单。
  2.Buffer经过优化改良,可以抑制非特异性反应,能够在更广的范围内进行准确定量。
  3.可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,对目的基因进行准确定量、检测,重复性好,可信度高。
  4.其中荧光定量MIX中已经添加合适浓度的荧光定量ROX校正染料,实验时无需额外添加,直接可以进行ROX校正实验。
  实时荧光PCR试剂盒注意事项:
  1.整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。
  2.为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
  3.每次实验应该设置阴、阳性对照。
  4.试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。
  5.试剂盒内所配阴性和阳性对照在*次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放。
  6.为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
  7.仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。
  8.ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。
  9.实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
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