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降钙素ELISA试剂盒操作时有哪些步骤是值得注意的?

发布时间:2022-12-12      点击次数:48

  降钙素ELISA试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附检测技术,测定样品中人降钙素原水平,向预先包被了抗人降钙素原抗体的酶标孔中,加入标准品和样本,温育后,加入标记的抗降钙素原抗体,再与HRP标记的链霉亲和素结合,形成免疫复合物,再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入显色底物TMB,产生蓝色,并在酸的作用下转化成黄色,在450nm处测定反应孔样品吸光度值,样本中的人降钙素原浓度与OD值成正比,通过绘制标准曲线计算出样本中人降钙素原的浓度。

  

  降钙素ELISA试剂盒操作步骤:

  

  1、加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100,余孔分别加标准品或待测样品100,注意不要有气泡,加样时将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37温育2小时。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

  

  2、弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100(临用前配制),酶标板加上覆膜,37温育1小时。

  

  3、弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

  

  4、每孔加检测溶液B工作液(临用前配制)100,加上覆膜,37温育1小时。

  

  5、弃去孔内液体,甩干,洗板5次,方法同步骤3。

  

  6、每孔加底物溶液90,酶标板加上覆膜37避光显色(反应时间控制在15-30分钟,当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显时,即可终止)。

  

  7、每孔加终止溶液50,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。

  

  8、立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(值)。

  

  降钙素ELISA试剂盒在人体内,主要由甲状腺的滤泡旁细胞(也称为C细胞)产生,在其他动物中,由末咽体产生,它的作用是降低血钙(Ca2+),抵抗甲状旁腺激素(PTH),在鱼类、爬行动物、鸟类和哺乳动物中发现了降钙素。

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