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内皮素ELISA试剂盒使用时正确的操作步骤

发布时间:2023-01-10      点击次数:19

  内皮素ELISA试剂盒采用的是双抗体夹心法酶联免疫吸附检测技术(ELISA)。测定样品中人内皮素1水平。向预先包被了抗人内皮素1抗体的酶标孔中,加入标准品和样本,温育后,加入生物素标记的抗内皮素1抗体。再与HRP标记的链霉亲和素结合,形成免疫复合物,再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入显色底物TMB,产生蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。最后,在450nm处测定反应孔样品吸光度(OD)值,样本中的人内皮素1浓度与OD值成正比,通过绘制标准曲线计算出样本中人内皮素1的浓度。

  

  内皮素ELISA试剂盒操作步骤

  

  1.取出试剂盒,室温(20-25℃)放置30分钟。

  

  2.分组:取出96孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组(6个浓度)、空白孔、待测样品组。

  

  注:为减少实验误差,保证准确性,建议设置复孔。

  

  3.加样:依照标准品的顺序分别加入00ul的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入00ul的蒸馏水;其余微孔中加入00ul的待测样本。

  

  4.加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液(空白对照孔除外)。

  

  5.温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于37℃恒温孵育小时。

  

  6.洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置5-30s,充分清洗酶标板5次,用吸水纸*拍干。

  

  7.显色:各孔加入显色剂A液50ul后,再加入显色剂B液50ul。

  

  8.终止:25-37℃下避光反应0-5分钟,加入50ul终止液。

  

  9.读板:在450nm波长读取各孔的OD值。

  

  内皮素ELISA试剂盒切勿冷冻,避免阳光直晒。未使用完的酶标板条应密封,2-8℃保存,具有方便、快速、灵敏等特点,因其性质、使用方便、价格低廉等特点。

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