ELISA 室内质量控制方法及评价标准

ELISA检测试剂盒的室内质量控制（IQC）是确保实验数据准确性和可靠性的核心环节，主要通过质控品监测、操作规范及数据分析实现。以下是具体方法与评价标准：

一、室内质控的核心方法

‌质控品准备‌

‌购买市售质控品‌：选择卫生部临床检验中心或知名厂商（如R&D、Abcam）提供的质控品，需包含高、中、低浓度值（如HBsAg的0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL）。

‌自制质控品‌：收集阳性血清，经灭活、稀释后与参考品对比定值，用于监测临界值（CO值）附近的样本。

‌试剂盒选择与验证‌

优先选择高特异性抗体对（至少一种单克隆抗体）和经国际标准品校准的试剂盒‌

2。

验证关键指标：回收率（80%-120%）、稀释线性（80%-120%）、精密度（板内CV<5%，板间CV<8%）‌。

‌操作规范‌

严格遵循说明书控制温育时间、洗涤次数（建议5-6次，每次30秒）及加样顺序‌。

使用校准移液器避免气泡，封板防止蒸发污染，温育温度需均匀（如37℃±0.5℃）‌。

‌数据分析与评价‌

‌标准曲线拟合‌：采用四参数逻辑回归（4PL），要求R²>0.98‌。

‌对照设置‌：包括阴性对照（空白孔、样本阴性对照）和阳性对照（标准品或阳性样本）‌。

‌重复实验与异常值排除‌：同一样本设2-3复孔，通过质控规则（如±20%偏差）剔除异常数据‌。

二、评价标准与质控指标

‌精密度‌

板内变异系数（CV）应<5%，板间CV<8%，确保批内和批间结果稳定‌。

‌准确度‌

‌回收率‌：检测值与理论值之比需在80%-120%范围内，反映样本基质干扰程度‌。

‌稀释线性‌：样本稀释后检测值应与理论值呈线性关系（80%-120%）‌。

‌灵敏度与特异性‌

检测限（LOD）需符合试剂盒标注，避免钩状效应（假阴性）‌。

通过阴性/阳性对照验证试剂盒抗干扰能力（如类风湿因子处理）‌。

三、常见问题与解决方案

‌复孔差异大‌：检查加样精度、洗涤彻底性及温育条件‌。

‌空白值高‌：排除试剂污染、封板不严或洗涤不彻底‌。

‌标准曲线异常‌：重新验证试剂活性或校准仪器‌。

四、总结

ELISA室内质控需结合质控品监测、操作规范及数据分析，通过回收率、精密度等指标评价试剂盒性能。定期参与室间质评（EQA）可进一步验证实验室准确性。