大鼠ELISA试剂盒样本处理要求和注意事项介绍

　　大鼠ELISA试剂盒样本处理要求和注意事项介绍
　　实验原理
　　大鼠ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被大鼠钾离子通道2（PIC2）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠钾离子通道2（PIC2）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
　　样本处理及要求
　　.血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后000×g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
　　2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃000×g离心5分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
　　3.组织匀浆：用预冷的PBS(0.0M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按:9的重量体积比，比如g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~0分钟，取上清检测。
　　4.细胞培养物上清或其它生物标本：请000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
　　注：标本溶血会影响后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
　　需要而未提供的试剂和器材
　　.酶标仪（450nm）
　　2.高精度加样器及枪头：0.5-0uL、2-20uL、20-200uL、200-000uL
　　3.37℃恒温箱
　　4.蒸馏水或去离子水
　　注意事项
　　.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
　　2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
　　3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
　　4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
　　5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
　　6.在储存和温育时避免强光直接照射。
　　7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
　　8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
　　9.不能使用过期产品。
　　0.如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
　　试剂准备
　　大鼠ELISA试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
　　20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按：20稀释，即份20×洗涤缓冲液加9份蒸馏水。