腺伴随病毒PCR试剂盒的PCR反应条件设置

腺伴随病毒PCR试剂盒的PCR反应条件设置：

a）预变性：95℃，5 min可以让白细胞裂解，释放可用于PCR扩增的基因组DNA。请勿缩短时间或降低温度。

b）退火温度：退火温度设置为引物Tm值即可。然而，使用高的退火温度可以有效减少非特异性扩增，并提高全血模板的扩增效率。因此，如扩增产物特异性较差，可以建立一个温度梯度反应去寻找引物模板zui适退火温度。

c）延伸时间：按30 sec/kb设定，如不足30 sec，设置30 sec即可。

d）扩增循环数：35个循环已可以扩增足量产物。太多的循环将会导致非特异性扩增增加。

PCR完成后，建议将反应液于000× g (大约4000 rpm) 离心～3 min以沉淀血细胞碎片，之后取上清进行下游分析。该步骤可有效去除多种血液组分。当使用高浓度血液模板时此步尤为重要，因为经过PCR循环，反应管中会存在大量的血细胞碎片。这些碎片会干扰下游的检测，如琼脂糖电泳检测。注意：由于血液本身的原因，PCR 结束后在 PCR 管的底部会出现透明凝胶状物质，此为正常现象。