小鼠白细胞介素8（IL-8 ）Elisa试剂盒实验原理 ：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白细胞介素 8（IL-8）水平。用纯化的小鼠
白细胞介素 8（IL-8）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素 8（IL-8），再与 HRP 标记的白细胞介素 8（IL-8）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素 8（IL-8）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠白细胞介素 8（IL-8）浓度。
试剂盒组成：
试剂盒组成  48 孔配置  96 孔配置  保存
说明书   份   份 
封板膜  2 片（48）  2 片（96） 
密封袋   个   个 
酶标包被板  ×48  ×96  2-8℃保存
标准品：35pg/mL  0.5ml× 瓶  0.5ml× 瓶  2-8℃保存
标准品稀释液  .5ml× 瓶  .5ml× 瓶  2-8℃保存
酶标试剂  3 ml× 瓶  6 ml× 瓶  2-8℃保存
样品稀释液  3 ml× 瓶  6 ml× 瓶  2-8℃保存
显色剂 A 液  3 ml× 瓶  6 ml× 瓶  2-8℃保存
显色剂 B 液  3 ml× 瓶  6 ml× 瓶  2-8℃保存
终止液  3ml× 瓶  6ml× 瓶  2-8℃保存
20 倍浓缩洗涤液  20ml× 瓶  30ml× 瓶  2-8℃保存
小鼠白细胞介素8（IL-8 ）Elisa试剂盒样本处理及要求：
.血清：室温血液自然凝固 0-20 分钟，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择 EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合 0-20 分钟后，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 00 万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟2左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
操作步骤
.  标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 0 孔，在*、第二孔中分别加标准品 00µl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液 50µl，混匀；然后从*孔、第二孔中各取 00µl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50µl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50µl 弃掉，再各取 50µl 分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取 50µl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50µl，混匀后从第七、第八孔中分别取 50µl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50µl，混匀后从第九第十孔中各取 50µl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50µl，浓度分别为 90 pg/mL，60 pg/mL ，30 pg/mL，5 pg/mL，7.5 pg/mL）。
2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 0µl（样品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.  温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.  配液：将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用。
5.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
7.  温育：操作同 3。
8.  洗涤：操作同 5。
9.  显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色5 分钟.
0. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 5 分钟以内进行。
注意事项 ：
． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 5-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔*孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存。
7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9． 本试剂不同批号组分不得混用。
0. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算 ：
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒性能 ：
.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.990 以上。
2.批内与批见应分别小于 9%和 %
检测范围 ：
5 pg/mL -00 pg/mL
保存条件及有效期 ：
.试剂盒保存：2-8℃。
2．小鼠白细胞介素8（IL-8 ）Elisa试剂盒有效期：6 个月