人KI-67酶联免疫分析试剂盒实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素-2（IL-2）水平。用纯化的人白细胞介素-2（IL-2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素-2（IL-2），再与HRP标记的羊抗人受体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素-2（IL-2）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人白细胞介素-2（IL-2）含量。

试剂盒组成

20倍浓缩洗涤液

50ml×瓶

7

终止液

6ml×瓶

2

酶标试剂

6ml×瓶

8

标准品（2μg/L）

0.5ml×瓶

3

酶标包被板

2孔×8条

9

标准品稀释液

.5ml×瓶

4

样品稀释液

6ml×瓶

0

说明书

份

5

显色剂A液

6ml×瓶

封板膜

2张  

6

显色剂B液

6ml×/瓶

2

密封袋

个

人KI-67酶联免疫分析试剂盒标本处理及要求 

．血清、血浆、脑脊液、腹腔液标本可直接测定；

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

3．采集后尽早进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

操作步骤

标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔0孔，在*、第二孔中分别加标准品00μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后在*孔和第二孔中先各取50μl弃掉；再各取50μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为8μg/L，4μg/L ，2μg/L，μg/L，0.5μg/L）。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品0μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色5分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后5分钟以内进行。
计算

  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项

．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡5-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。

请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

0. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

检测范围：

0.4μg/L -0μg/L

规格：

96人份/盒

人KI-67酶联免疫分析试剂盒保存条件及有效期

．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月