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自然杀伤细胞(NK)ELISA试剂盒使用说明书
发布时间:2022-11-15      点击次数:400

自然杀伤细胞(NK)ELISA试剂盒使用说明书
 

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围:

3nmol/L - 80nmol/L

 

使用目的:

96T

本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中Ⅰ型胶原 C 端肽(CTX-Ⅰ)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠Ⅰ型胶原 C 端肽(CTX-Ⅰ)水平。用纯化的

大鼠Ⅰ型胶原 C 端肽(CTX-Ⅰ)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次

加入Ⅰ型胶原 C 端肽(CTX-Ⅰ),再与 HRP 标记的Ⅰ型胶原 C 端肽(CTX-Ⅰ)抗体结合,形成

抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下

转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的Ⅰ型胶原 C 端肽

(CTX-Ⅰ)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样

品中大鼠Ⅰ型胶原 C 端肽(CTX-Ⅰ)浓度。

试剂盒组成

 

30 倍浓缩洗涤液

20ml× 瓶

7 终止液

6ml× 瓶

 

2 酶标试剂

6ml× 瓶

8 标准品(60 nmol/L) 0.5ml× 瓶

 

3 酶标包被板

4 样品稀释液

5 显色剂 A 液

6 显色剂 B 液

标本要求

2 孔×8 条

6ml× 瓶

6ml× 瓶

6ml×/瓶

9 标准品稀释液

0 说明书

封板膜

2 密封袋

.5ml× 瓶

2 张

.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀

释。

80nmol/L

40nmol/L

20nmol/L

0nmol/L

5nmol/L

5 号标准品

4 号标准品

3 号标准品

2 号标准品

号标准品

50µl 的原倍标准品加入 50µl 标准品稀释液

50µl 的 5 号标准品加入 50µl 标准品稀释液

50µl 的 4 号标准品加入 50µl 标准品稀释液

50µl 的 3 号标准品加入 50µl 标准品稀释液

50µl 的 2 号标准品加入 50µl 标准品稀释液

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,

然后再加待测样品 0µl(样品zui终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽

量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此

重复 5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。

7. 温育:操作同 3。

8. 洗涤:操作同 5。

9. 显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

5 分钟.

0. 终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止

液后 5 分钟以内进行。

操作程序总结:

计算

以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的

OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标

准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,

即为样品的实际浓度。

注意事项

.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 5-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间

控制在 5 分钟内,如标本数量多,使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值

大于标准品孔*孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计

算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

0. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

保存条件及有效期

.试剂盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6 个月

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