人ELISA试剂盒说明书

实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人水平。用纯化的人抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入，再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人浓度。 

试剂盒组成 

30倍浓缩洗涤液 20ml×瓶 7 终止液 6ml×瓶
2 酶标试剂 6ml×瓶 8 标准品（400 ng/L） 0.5ml×瓶
3 酶标包被板 2孔×8条 9 标准品稀释液 .5ml×瓶
4 样品稀释液 6ml×瓶 0 说明书 份
5 显色剂A液 6ml×瓶 封板膜 2张 
6 显色剂B液 6ml×/瓶 2 密封袋 个
人ELISA试剂盒技术参数 标本要求 
．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
200ng/L 5号标准品 50µl的原倍标准品加入50µl标准品稀释液
00ng/L 4号标准品 50µl的5号标准品加入50µl标准品稀释液
50ng/L 3号标准品 50µl的4号标准品加入50µl标准品稀释液
25ng/L 2号标准品 50µl的3号标准品加入50µl标准品稀释液
2.5ng/L 号标准品 50µl的2号标准品加入50µl标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品0µl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。 
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色5分钟.
0. 终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后5分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 
注意事项
．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡5-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
0. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月