欢迎来到上海谷研实业有限公司网站!
咨询电话:18321818584
article技术文章
首页 > 技术文章 > 胸膜肺炎放线杆菌PCR检测试剂盒产品实验的反应五要素

胸膜肺炎放线杆菌PCR检测试剂盒产品实验的反应五要素

发布时间:2022-11-15      点击次数:337

胸膜肺炎放线杆菌PCR检测试剂盒产品实验的反应五要素:

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 5-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至0kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是zui末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.~umol或0~00pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
 

上海谷研实业有限公司
  • 联系人:销售部
  • 地址:上海松江区莘砖公路1290号
  • 邮箱:3004918891@qq.com
  • 手机:18321818584 / 15026555973
关注我们

欢迎您关注我们的微信了解更多信息

扫一扫
关注我们
版权所有 © 2022 上海谷研实业有限公司 All Rights Reserved    备案号:沪ICP备12048703号-1    sitemap.xml
本公司所有产品仅供科学实验,不做其他科学实验外的使用!