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活性测定试剂盒​操作过程

发布时间:2022-11-15      点击次数:387

活性测定试剂盒操作过程:


一、粗酶液提取:


.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为:5~0的比例(建议称取约0.g组织,加入mL试剂一)冰浴匀浆,8000g,4℃离心0min,取上清,即粗酶液。2.血清或培养液:直接测定。 3.细菌、真菌:按照细胞数量(04个):试剂一体积(mL)为500~000:的比例(建议500万细胞加入mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心0min,取上清置于冰上待测。


二、测定操作: .分光光度计预热30min,调节波长到680nm,蒸馏水调零。2.试剂二、试剂三和试剂四置于30℃水浴保温30min。 3.对照管:取一支EP管,加入00μL粗酶液,200μL试剂二,混匀后置于30℃水浴保温0min;加入200μL试剂三,混匀后8000g,4℃离心0min;取200μL上清液,加入新的EP管,再加入000μL试剂四,200μL试剂五,混匀后置于30℃水浴保温20min,于680nm测定光吸收,记为A对照管。 4.测定管:取一支EP管,加入00μL粗酶液,200μL试剂三,混匀后置于30℃水浴保温0min;加入200μL试剂二,混匀后8000g,4℃离心0min;取200μL上清液,加入新的EP管,再加入000μL试剂四,200μL试剂五,混匀后置于30℃水浴保温20min,于680nm测定光吸收,记为A测定管。(注意与空白管不同,先加试剂三,后加试剂二) 5.空白管:取EP管,加入200μL蒸馏水,000μL试剂四,200μL试剂五,混匀后置于30℃水浴保温20min,于680nm测定光吸收,记为A空白管。 6.标准管:取EP管,加入200μL标准品,000μL试剂四,200μL试剂五,混匀后置于30℃水浴保温20min,于680nm测定光吸收,记为A标准管。注意:空白管和标准管只需要测定一次。

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