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猪钩端螺旋体抗体IgG (Lep-IgG)ELISA试剂盒使用方法
发布时间:2022-11-15      点击次数:361

猪钩端螺旋体抗体IgG (Lep-IgG)ELISA试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于检测猪血清,血浆中猪钩端螺旋体抗体IgG (Lep-IgG)水平。

实验原理:

  本试剂盒采用双抗原夹心酶联免疫法(ELISA)测定标本中猪钩端螺旋体抗体IgG (Lep-IgG)。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可与样品中钩端螺旋体抗体IgG (Lep-IgG)相结合,经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中猪钩端螺旋体抗体IgG (Lep-IgG)的存在与否。

 

试剂盒组成:

试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存

说明书 份 份  

封板膜 2片(48) 2片(96)  

密封袋 个 个  

酶标包被板 ×48 ×96 2-8℃保存

阴性对照 0.5ml×瓶 0.5ml×瓶 2-8℃保存

阳性对照 0.5ml×瓶 0.5ml×瓶 2-8℃保存

酶标试剂 3 ml×瓶 6 ml×瓶 2-8℃保存

样品稀释液 3 ml×瓶 6 ml×瓶 2-8℃保存

显色剂A液 3 ml×瓶 6 ml×瓶 2-8℃保存

显色剂B液 3 ml×瓶 6 ml×瓶 2-8℃保存

终止液 3ml×瓶 6ml×瓶 2-8℃保存

浓缩洗涤液 (20ml×20倍)×瓶 (20ml×30倍)×瓶 2-8℃保存

 

样本处理及要求:

. 血清:室温血液自然凝固0-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合0-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到00万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

 

猪钩端螺旋体抗体IgG (Lep-IgG)ELISA试剂盒操作步骤:

编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)

加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品0μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,

温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用

洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

温育:操作同3。

洗涤:操作同5。

显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色5分钟

终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后5分钟以内进行。

 

结果判定:

  试验有效性:阳性对照孔平均值≥.00; 阴性对照平均值≤0.0

  临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.5

  阴性判定:样品OD值< 临界值(CUT OFF)者为人钩端螺旋体抗体IgG (Lep-IgG)阴性

  阳性判定:样品OD值≥ 临界值(CUT OFF)者为人钩端螺旋体抗体IgG (Lep-IgG)阳性

注意事项

.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。

2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡5-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物请避光保存。

6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm

7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全。

 

猪钩端螺旋体抗体IgG (Lep-IgG)ELISA试剂盒保存条件及有效期

.试剂盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6个月

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