人蛋白ELISA检测试剂盒的操作步骤和结果判断

　　人蛋白ELISA检测试剂盒是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。 由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。

　　实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。

　　一、双抗体夹心法是检测抗原常用的方法，操作步骤如下：

　　、将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。

　　2、加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物，洗涤除去其他未结合的物质。

　　3、加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。*洗涤未结合的酶标抗体，此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。

　　4、加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。

　　二、定量测定结果判断：

　　人蛋白ELISA检测试剂盒操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线，测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，较呈直线的部分是理想的检测区域。

　　实验开始前，请提前配制好所有试剂；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，均应用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。