猪ELISA试剂盒在实际测定操作中要注意哪些问题？

　　猪ELISA试剂盒具有敏感性高，特异性强，快速等特点，目前广泛应用于农兽药、真菌残留检测，该方法从加样、洗板、显色到读数步骤繁多，其中任何一步控制不好都可能影响检测结果的准确性。因此，在实际测定操作中要注意以下几点。

　　.试剂盒回温

　　ELISA检测试剂盒为冷藏(2℃-8℃)保存。从冰箱拿出来后，先不要急于打开试剂盒，要等试剂盒的温度平衡至室温且试剂盒盒表面无冷凝水，检测所用的试剂需充分混匀且*溶解后再用，提前~2小时取出试剂盒，放在室温中；或在预设25℃恒温培养箱中平衡30分钟~60分钟。

　　2.环境温度的控制

　　)实验室应配备温湿度表，且确保定期计量。

　　2)根据天气情况设定实验室空调制冷或加温功能，待室温稳定且无干扰的条件下再开始检测流程。

　　3)选用带温控装置的孵育仪器，如恒温孵育器、恒温培养箱、多功能酶标仪等。注意要提前开启预热。

　　猪ELISA试剂盒的操作方法：

　　.包被：在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。

　　2.加样：加一定稀释的待检样品0.ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育小时，然后洗涤。

　　3.加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体0.ml。

　　4.加底物液显色：于各反应孔中加入底物溶液0.ml，37℃0～30分钟。

　　5.终止反应：于各反应孔中加入酸0.05ml。

　　6.结果判定：猪ELISA试剂盒可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或较浅，依据所呈颜色的深浅。