降钙素ELISA试剂盒的正确操作步骤一起来了解下

发布时间：2022-11-15 点击次数：411

降钙素ELISA试剂盒实验原理：用纯化的PCT抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、化的PCT抗体、HRP标记的亲和素，经过*洗涤后用底物（TMB）显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的PCT呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（值），计算样品浓度。

　　降钙素ELISA试剂盒操作步骤：

　　实验开始前，各试剂均应平衡至室温，试剂不能直接在37溶解；试剂或样品配制时，均需充分混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

　　1、加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100，余孔分别加标准品或待测样品100，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37温育2小时。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

　　2、弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100（临用前配制），酶标板加上覆膜，37温育1小时。

　　3、弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

　　4、每孔加检测溶液B工作液（临用前配制）100，加上覆膜，37温育1小时。

　　5、弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。

　　6、每孔加底物溶液90，酶标板加上覆膜37避光显色（反应时间控制在15-30分钟，当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显时，即可终止）。

　　7、每孔加终止溶液50，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。

　　8、立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度（值）。