使用方法:
一、样品 RNA 的制备
1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意:可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆转录)反应合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系(20 μL 体系)
2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。
3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆转录酶(含 RI),
反应终体积为 20μL。
4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。
5. 70℃保温 10 分钟以终止反应,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用,丌需要纯化。产品名称:鱼源性成分(Fish)核酸检测试剂盒品牌
规格:48T/盒
类别:荧光-PCR法
运输:低温、避光、快递免费送货上门。
用途:生化实验,合成实验等试验。
运输及保存:低温运输,-20℃保存, 保存期限为 6 个月。
自备试剂:样品 RNA。
性能指标:点击了解更多荧光-PCR法。
1.试剂盒检测特异性为100%
2. 检测试剂盒重现性为100%
3. 灵敏度可达到103/ml
4. 有效期为6个月
注意事项:
①加入试剂的顺序应*,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以最低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。2,3,4-三氟苯酚 250mL RIPA Buffer with EGTA 常温保存
5-羟基-1-四氢萘酮 125mL RIPA Buffer with Glycerol,2X 常温保存
11-溴十一 125mL RIPA Buffer with Triton and Glycerol,2X 常温保存
2-氨基-2-苯基乙 250mL RIPA Buffer with Triton, 1X 常温保存
对氨苯 125mL RIPA Buffer with Triton, 2X 常温保存
DL-2-氨基丁 50mL RIPA Buffer with Triton, 5X 常温保存
3-氨基-4-氯苯甲 250mL RIPA Buffer without SDS 常温保存
三基溴硅烷 125mL RIPA Buffer without SDS,2X 常温保存
4-溴黎芦醚 125mL RIPA Buffer,2X 常温保存
4-苯盐盐 50mL RIPA Buffer,5X 常温保存
FMOC-L-丙氨 250mL RIPA Buffer—2 常温保存
环丙甲酯 125mL RIPA Buffer—2,2X 常温保存
N-Boc-D-哌啶-2-羧 250mL RIPA without SDS with EDTA 常温保存
吡唑 2mL RNA Loading Buffer,6X 常温保存
异恶唑 1mL RNA Loading Buffer,6X 常温保存
鱼源性成分(Fish)核酸检测试剂盒品牌OTF2B(octamer transcription factor 2B) 人八聚体转录因子 CAS: 90045-38-8 规格: 1.5g
OTF2A(octamer transcription factor 2A) 人八聚体转录因子 CAS: 50647-08-0 规格: 1.5g
DUTP(deoxyuridinetriphate) 人脱氧尿三磷 CAS: 4562-36-1 规格: 50mg
CMR(costimulatory molecules recptor) 人协同刺激分子受体 CAS: 93479-97-1 规格: 200mg
PG(peptidoglycan) 人肽聚糖 CAS: 规格: 20mg
LAM(Lipoarabinomannan) 人脂阿拉伯甘露聚糖 CAS: 119018-29-0 规格: 20mg
MN(Mannose) 人甘露糖 CAS: 119018-30-3 规格: 20mg
MR(mannose receptor) 人甘露糖受体 CAS: 规格: 20mg
CpG-ODN(CpG oligodeoxynucleotide) 人未甲基化寡聚脱氧核苷 CAS: 29094-61-9 规格: 125mg
IRAP(ICE protease-activating factor) 人ICE蛋白酶激活因子 CAS: 33288-71-0 规格: 25mg
NON(nonmethylated oligonucleotide0 人非甲基化寡核苷 CAS: 规格: 15mg
Protein Z 人蛋白Z CAS: 66375-96-0 规格: 15mg
Protein S 人蛋白S CAS: 规格: ea
sEPCR(soluble endothelial protein C receptor) 人可溶性血管内皮细胞蛋白C受体 CAS: 66-84-2 规格: 200mg
C/EBP Epsilon (CCAAT/enhancer binding protein epsilon) 人CCAAT增强子结合蛋白ε CAS: 1113-83-3 规格: 200mg