常见问题:点击了解更多荧光-PCR法。
一.没有扩增产物
1.循环温度:变性温度、退火温度
2.引物设计
3.DNA聚合酶活性
4.抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合 酶活性的成份)
5、DNA样品
二.非特异产物及电泳呈涂布状
1.Mg2 浓度
2.调整引物、模板、聚合酶的用量
3.适当减少循环数
4.适当提高退火温度,缩短退火或延伸时间
产品名称 | 鲨鱼源性成分(Shark)核酸检测试剂盒品牌 |
规格 | 48T/盒 |
分类 | 荧光-PCR法 |
使用及效果:
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。氯啶盐 500mL Phospho-Protein Extraction Buffer II 常温保存
L-赖氨酯盐盐 500mL Phospho-Protein Extraction Buffer III 常温保存
4-溴-1,2-亚甲二氧苯 500mL Phospho-Protein Extraction Buffer IV 常温保存
叠氮磷二苯酯 100mL PIPES Buffer,0.5M, pH5.5 常温保存
三氧化啶 100mL PIPES Buffer,0.5M, pH6.0 常温保存
3,4-二氯苯乙酮 100mL PIPES Buffer,0.5M, pH6.5 常温保存
盐 100mL PIPES Buffer,0.5M, pH6.8 常温保存
2,4-二氯啶 100mL PIPES Buffer,0.5M, pH7.0 常温保存
2,3-二氟苯甲 100mL PIPES Buffer,0.5M, pH7.4 常温保存
N-苄氧羰基-D-丙氨 100mL PIPES Buffer,0.5M, pH7.5 常温保存
2-氯-N,N-二基乙胺 100mL PIPES Buffer,0.5M, pH8.0 常温保存
环已羧 250mL PIPES Buffer,1.0M, pH6.0 常温保存
4-苄氧基啶 N-氧化物 250mL PIPES Buffer,1.0M, pH6.5 常温保存
苄氧基胺盐盐 250mL PIPES Buffer,1.0M, pH6.8 常温保存
6-溴-1-己烯 250mL PIPES Buffer,1.0M, pH7.0 常温保存
Hsp-60(Heat Shock Protein 60) 人热休克蛋白60 CAS: 61718-82-9 规格: 200mg
HSP gp96(Heat Shock Protein glycoprotein 96) 人热休克蛋白糖蛋白96 CAS: NA 规格: 25mg
CT-1(cardiotrophln 1) 人心肌营养素1 CAS: 93957-55-2 规格: 350mg
CP/CER(Ceruloplasmin) 人铜蓝蛋白 CAS: 规格: 25mg
HSP-90(Heat Shock Protein 90) 人热休克蛋白90 CAS: 129332-29-2 规格: 15mg
HSP-70(Heat Shock Protein 70) 人热休克蛋白70 CAS: 59-30-3 规格: 500mg
HSP-40(Heat Shock Protein 40) 人热休克蛋白40 CAS: 1492-18-8 规格: 50mg
HSP-20(Heat Shock Protein 20) 人热休克蛋白20 CAS: 485-72-3 规格: 50mg
MYS(Myosin) 人肌球蛋白 CAS: 183814-30-4 规格: 100mg
GS(Gelsolin) 人凝溶胶蛋白 CAS: 规格: 20mg
CRP(C-Reactive Protein) 人C反应蛋白 CAS: 规格: 20mg
ALD(aldosterone) 人固酮 CAS: 规格: 50mg
MYO/MB(Myoglobin) 人肌红蛋白 CAS: 134-05-4 规格: 25mg
cTn- I (cardiac troponin I ) 人心肌肌钙蛋白Ⅰ CAS: 92134-98-0 规格: 250mg
Tie1(tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 1) 人血管生成素受体/含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨激酶1 CAS: 57-48-7 规格: 125mg
特点:
1. 鲨鱼源性成分(Shark)核酸检测试剂盒品牌即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板,操作简单,定量准确快速。
2. 引物经过优化,特异性强。预期的 PCR 产物长度为 560 bp。
3. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
4. 提供阳性对照,便于分析试验结果。
用途:
1. 方便,用户只需准备模板和引物既可以进行PCR 实验。
2. 快捷,操作步骤已经限度地简化,能减少污染,降低实验误差。
3. 本产品A 型含电泳染料,PCR 反应液可直接上样电泳,进一步简化了操作。
4. 由于各成分的浓度和比例都经过精心优化,反应的灵敏度高,特异性强。能扩增各种常见的DNA 样品。
5. 产物可直接用于T 载体克隆,不需要额外的加A 反应。
使用及效果:将本产品15 μL 与用户自备的模板,引物和水共15 μL 混合后,直接进行PCR反(PCR 参数由用户自己确定),反应结束后直接取10 μL 电泳检查扩增结果。