常见问题:点击了解更多荧光-PCR法。
一.没有扩增产物
1.循环温度:变性温度、退火温度
2.引物设计
3.DNA聚合酶活性
4.抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合 酶活性的成份)
5、DNA样品
二.非特异产物及电泳呈涂布状
1.Mg2 浓度
2.调整引物、模板、聚合酶的用量
3.适当减少循环数
4.适当提高退火温度,缩短退火或延伸时间
产品名称 | 心病毒(SAFV)核酸检测试剂盒品牌 |
规格 | 48T/盒 |
分类 | 荧光-PCR法 |
使用及效果:
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。2-氯吡 2 ug pYIP5 低温运输,-20℃保存
2-氨基咪唑盐 2 ug pBC-Hygro 低温运输,-20℃保存
2-氯烟乙酯 2 ug pYr-1.1-hU6-EGFP(可包装腺病毒) 低温运输,-20℃保存
3-基吡唑 2 ug pBC-SK 低温运输,-20℃保存
牛胆钠 2 ug pYr-1.2-mU6-EGFP 低温运输,-20℃保存
1-苄基-3-乙氧羰基-4-哌啶酮盐盐 2 ug pYr-1.3-hH1-EGFP 低温运输,-20℃保存
6-溴茚酮 2 ug pYr-1.4-h7SK-EGFP 低温运输,-20℃保存
3,5-二氨基-6-氯吡-2-羧酯 2 ug pYr-2.1-hU6(无荧光) 低温运输,-20℃保存
三苯基膦醋钯 2 ug pYr-2.3- hH1(无荧光) 低温运输,-20℃保存
3-溴-2-基丙烯 2 ug pYr-AdShuttle- 1 低温运输,-20℃保存
叔戊醇钠 2 ug pYr-AdShuttle- 2 低温运输,-20℃保存
1,3,5-三叔丁苯 2 ug pYr-AdShuttle- 3 低温运输,-20℃保存
环庚甲 2 ug pBD-NF-κB 低温运输,-20℃保存
三丁基锡 2 ug pYr-AdShuttle- 4 低温运输,-20℃保存
3-氨基啶-2-羧 2 ug pYRP7 低温运输,-20℃保存
IL-2 大鼠白介素2 CAS: 55-56-1 规格: 50mg
IL-1 Alpha 大鼠白介素1α CAS: 106-47-8 规格: 200mg
IL-18 大鼠白介素18 CAS: 6001-64-5 规格: 200mg
ADM(adrenomedullin) 人肾上腺髓质素 CAS: 327-97-9 规格: 50mg
IL-10 mouse 小鼠白介素10 CAS: 规格: 20mg
irGH(Immunoreactive growth hormone) 人免疫反应性生长激素 CAS: 规格: 100mg
IGF-2 大鼠胰岛素样生长因子2 CAS: 50-63-5 规格: 500mg
IGF-1 大鼠胰岛素样生长因子1 CAS: 86-98-6 规格: 25mg
ADH/VP/AVP(antidiuretic hormone/vasopressin/arginine vasopressin) 人抗利尿激素/血管加压素/精氨加压素 CAS: 5270-74-6 规格: 10mg
GAL(galanin) 人甘丙肽/甘丙素 CAS: 58-94-6 规格: 200mg
IFN- Gamma 大鼠γ干扰素 CAS: 32239 规格: 125mg
ICAM-1/CD54 大鼠细胞间粘附分子1 CAS: 5538-41-0 规格: 25mg
SR(secretin receptor) 人促胰液素/分泌素受体 CAS: 113-92-8 规格: 125mg
ER(Estrogen Receptor) 人雌激素受体 CAS: 113-92-8 规格: 60tables
GM-CSF 大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 CAS: 96-20-2 规格: 200mg
特点:
1. 心病毒(SAFV)核酸检测试剂盒品牌即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板,操作简单,定量准确快速。
2. 引物经过优化,特异性强。预期的 PCR 产物长度为 560 bp。
3. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
4. 提供阳性对照,便于分析试验结果。
用途:
1. 方便,用户只需准备模板和引物既可以进行PCR 实验。
2. 快捷,操作步骤已经限度地简化,能减少污染,降低实验误差。
3. 本产品A 型含电泳染料,PCR 反应液可直接上样电泳,进一步简化了操作。
4. 由于各成分的浓度和比例都经过精心优化,反应的灵敏度高,特异性强。能扩增各种常见的DNA 样品。
5. 产物可直接用于T 载体克隆,不需要额外的加A 反应。
使用及效果:将本产品15 μL 与用户自备的模板,引物和水共15 μL 混合后,直接进行PCR反(PCR 参数由用户自己确定),反应结束后直接取10 μL 电泳检查扩增结果。