产品名称:水泡性口炎病毒PCR检测试剂盒供应商
英文名称:Vesicular Stomatitis Virus(VSV)RTPCR
规格:详见说明书
类别:PCR检测试剂盒
运输:低温、避光、快递免费送货上门。
用途:生化实验,合成实验等试验。
运输及保存:低温运输,-20℃保存, 保存期限为 6 个月。
自备试剂:样品 RNA。
性能指标:点击了解更多PCR检测试剂盒。
1.试剂盒检测特异性为100%
2. 检测试剂盒重现性为100%
3. 灵敏度可达到103/ml
4. 有效期为6个月
使用方法:
一、样品 RNA 的制备
1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意:可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆转录)反应合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系(20 μL 体系)
2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。
3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆转录酶(含 RI),
反应终体积为 20μL。
4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。
5. 70℃保温 10 分钟以终止反应,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用,丌需要纯化。
注意事项:
①加入试剂的顺序应*,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以最低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。2,5-二氯苯乙酮 2476-37-1 1g Chloramphenicol Powder 4℃保存
异丙基三乙氧基硅烷 24801-88-5 10mL Chloramphenicol Solution -20℃避光保存
N-叔丁氧羰基-N'-苄氧羰基-L-鸟氨 2480-93-5 1mL Cyclosporin A Solution -20℃避光保存
D-别苏氨 24830-94-2 0.1mL Cytochalasin B Solution -20℃避光保存
烯丙基三丁基锡 24850-33-7 1mL Dexamethasone DXM Solution -20℃避光保存
4-氨基-3-基甲 2486-70-6 10mL Erythromycin Solution -20℃避光保存
4-氨基-2-基甲 2486-75-1 100mg G418 Sulfate (Geneticin) Powder 4℃避光保存
2-溴-4'-羟苯乙酮 2491-38-5 250mg Hygromycin B Powder 4℃避光保存
(R)-(-)-3-羟基丁乙酯 24915-95-5 2mL Gentamycin Sulfate Solution -20℃避光保存
丙烯苄酯 2495-35-4 10mL Kanamycin Sulfate Solution -20 ℃避光保存
烯丙基钠 2495-39-8 1g Kanamycin Sulfate Powder 4℃避光保存
聚乙二醇二甲醚 24991-55-7 1mL Mitomycin Solution 4℃避光保存
1-基-1H-吡唑-4-甲 25016-11-9 1g Neomycin Sulfate Powder 4℃保存
对氯苯乙酰 25026-34-0 5mL Novobiocin Sodium Solution -20℃避光保存
7-羟基-5-基-1,3,4-三氮吲哚利 2503-56-2 10mL Nystatin Solution -20℃避光保存
水泡性口炎病毒PCR检测试剂盒供应商对称二苯脲 规格:300mg Curcuminoids
2-萘基脲 规格:ea
氨基脲盐盐 规格:50mg
蒽聪 规格:25mg
苊醌 规格:100mg Dehydrocarteolol Hydrochloride
蒽醌 规格:15mg
1,4-二羟基蒽醌 规格:50mg
1,8-二羟基蒽醌 规格:10mg
1,2-苯蒽 规格:25mg
苄脒 规格:50mg Docetaxel Identification
2,4-二硝基氯苯 规格:15mg
规格:40mg
铝 规格:25mg
磷二 规格:150mg
无水磷二 规格:25mg