性能指标:点击了解更多荧光-PCR法。
1.试剂盒检测特异性为100%
2. 检测试剂盒重现性为100%
3. 灵敏度可达到103/ml
4. 有效期为6个月产品名称:猪水疱性口炎(VSV)核酸检测试剂盒品牌
规格:48T/盒
类别:荧光-PCR法
运输:低温、避光、快递免费送货上门。
用途:生化实验,合成实验等试验。
运输及保存:低温运输,-20℃保存, 保存期限为 6 个月。
自备试剂:样品 RNA。
使用方法:
一、样品 RNA 的制备
1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意:可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆转录)反应合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系(20 μL 体系)
2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。
3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆转录酶(含 RI),
反应终体积为 20μL。
4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。
5. 70℃保温 10 分钟以终止反应,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用,丌需要纯化。
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以最低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。L-焦谷氨乙酯 7149-65-7 10g L-Phenylalanine 室温干燥避光保存
L-亮氨醇 7533-40-6 1g Phenylmethyl Sulfonyl Fluoride(PMSF) 室温保存
苏氨 72-19-5 100mg 6-Phosphogluconic Acid Barium salt Hydrate 室温干燥避光保存
N-(2-氯乙基)吡咯烷盐盐 7250-67-1 100g Phytagel (Gellan Gun) 室温保存
N,N'-酰二咪唑 7189-69-7 100mL Phytic Acid 室温阴凉保存
N-BOC-L-脯氨醇 69610-40-8 10g Phytic Acid Sodium Salt Hydrate 室温阴凉保存
N-基-4-溴苄胺 699-03-6 25g Pig Bile Salts 室温保存
N-基二环己基胺 7560-83-0 10g 1,4-Piperazinediethane Sulfonic Acid (PIPES) 室温干燥保存
N-叔丁氧羰基-1,3-丙二胺 75178-96-0 100mL Poly(Ethyleneimine) Solution 室温保存
N-乙基哌啶 766-09-6 25mL Poly(Ethylene Glycol Solution) 4℃保存
N-乙酰氨基葡萄糖 7512-17-6 1g Polygalacturonic Acid Sodium Salt 室温保存
N-异丙苯胺 768-52-5 25mg Poly-L-Lysine -20℃保存
氨 7664-41-7 25mg Poly-L-Lysine -20℃保存
苯基二基氯硅烷 768-33-2 25mg Poly-L-Lysine -20℃保存
啶三唑酮 6969-71-7 100mg Polymyxin B Sulfate 4℃保存
猪水疱性口炎(VSV)核酸检测试剂盒品牌AMPK 鱼磷化腺苷活化蛋白激酶 进口/国产常温,避光 规格:100mg
RBC(Rat anti-red cell antibody ) 大鼠抗红细胞抗体 进口/国产常温,避光 规格:50mg
Fc Epsilon R II /CD23(Receptor II for the Fc region of immunoglobulin E,Fc Epsilon R II ) 人免疫球蛋白E Fc段受体Ⅱ 进口/国产常温,避光 规格:100mg
Fc GammaR III /CD16(Receptor III for the Fc region of immunoglobulin G,Fc GammaR III ) 人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅲ 进口/国产常温,避光 规格:100mg
PV 鱼卵黄高磷蛋白 进口/国产常温,避光 规格:100mg
NF-KapB p65 (Rabbit nuclear factor-KapB p65) 兔核因子κB亚基p65亲和肽 进口/国产常温,避光 规格:100mg
Mouse small nuclear ribonucleoprotein,snRNP/Sm 小鼠抗小核糖核蛋白/Sm抗体 进口/国产常温,避光 规格:100mg
乙型肝炎二对半全套 进口/国产常温,避光 规格:50mg
CD3(Rat Cluster of differentiation 3,CD3) 大鼠CD3分子 进口/国产常温,避光 规格:100mg
乙型肝炎二对半全套(立可读) 进口/国产常温,避光 规格:100mg
HBsAg 乙型肝炎表面抗原 进口/国产常温,避光 规格:50mg
HBsAb 乙型肝炎表面抗体 进口/国产常温,避光 规格:50mg
HBeAg 乙型肝炎e抗原 进口/国产常温,避光 规格:100mg
HBeAb 乙型肝炎e抗体 进口/国产常温,避光 规格:100mg
HBcAb 乙型肝炎核心抗体 进口/国产常温,避光 规格:100mg
注意事项:
①加入试剂的顺序应*,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。