使用方法:
一、样品 RNA 的制备
1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意:可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆转录)反应合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系(20 μL 体系)
2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。
3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆转录酶(含 RI),
反应终体积为 20μL。
4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。
5. 70℃保温 10 分钟以终止反应,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用,丌需要纯化。产品名称:伊氏锥虫PCR检测试剂盒供应商
英文名称:Trypanosoma evansiPCR
规格:详见说明书
类别:PCR检测试剂盒
运输:低温、避光、快递免费送货上门。
用途:生化实验,合成实验等试验。
运输及保存:低温运输,-20℃保存, 保存期限为 6 个月。
自备试剂:样品 RNA。
性能指标:点击了解更多PCR检测试剂盒。
1.试剂盒检测特异性为100%
2. 检测试剂盒重现性为100%
3. 灵敏度可达到103/ml
4. 有效期为6个月
注意事项:
①加入试剂的顺序应*,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以最低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。4-氯苯乙醇 1875-88-3 50g Nonfat Milk Powder 室温
对氯苯乙 1878-66-6 50mL Southern Blocking Buffer (NC) -20℃保存
3-苯乙 1878-69-9 50mL Southern Blocking Buffer (Nylon) -20℃保存
4-溴-2-噻吩甲 18791-75-8 1张 Nitrocellulose Membrane 常温
L-2,4-二氨基丁盐盐 1883-09-6 1张 Nitrocellulose Membrane 常温
2,2-二苯基乙醇 1883-32-5 1张 Nylon Membrane 常温
1,1-二甲氧基-N,N-二基乙胺 18871-66-4 5次 Nonradioactive Probe Hybridization Kit 杂交液-20℃保存,其余成分常温
3,4-二氯苄溴 18880-04-1 5次 Nonradioactive Probe Hybridization Kit 杂交液-20℃保存,其余成分常温
3-氟-5-(三氟基)苯甲 188815-30-7 5次 BCIP-NBT DIG Detection Kit 10×封堵液和BCIP-NBT浓缩液需要-20℃保存,AP标记的抗DIG抗体需要4℃保存
溴代异辛烷 18908-66-2 5次
1-(3-二基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺 1892-57-5 5次
2-溴-6-三氟基啶 189278-27-1 5次
1-Boc-4-基-4-哌啶甲 189321-63-9 5次
BOC-D-丙氨 18942-49-9 5次 ECL DIG Detection Kit 10×封堵液需要-20℃保存,AP标记的抗DIG抗体和ECL底物需要4℃保存
3-氟--5-基甲 189628-39-5 5次
伊氏锥虫PCR检测试剂盒供应商环辛 规格:1.2ml×3ampules Pentane
2-癸 规格:1.2ml×3ampules Propyl Acetate
二苯甲 规格:150mg Tacrolimus
9-芴 规格:100mg Pamidronate Disodium
2-氟苯乙 规格:1ml Dibutyl Sebacate (AS)
α-紫罗 规格:15mg
4-甲氧基苯乙 规格:500mg Phenol
1-甲基-2-吡咯 规格:10mg Salmeterol Related Compound B
α-萘黄 规格:1.2ml×3ampules
4-硝基苯乙 规格:50mg Nordazepam CIV
2-壬 规格:250mg
2-辛 规格:20mg
三氟乙酰丙 规格:10mg
氮 规格:200mg Resorcinol
吡啶盐盐 规格:200mg Propylene Carbonate