使用方法:
一、样品 RNA 的制备
1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意:可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆转录)反应合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系(20 μL 体系)
2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。
3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆转录酶(含 RI),
反应终体积为 20μL。
4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。
5. 70℃保温 10 分钟以终止反应,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用,丌需要纯化。产品名称:中间葡萄球菌PCR检测试剂盒品牌
英文名称:Staphylococcus intermediusPCR
规格:详见说明书
类别:PCR检测试剂盒
运输:低温、避光、快递免费送货上门。
用途:生化实验,合成实验等试验。
运输及保存:低温运输,-20℃保存, 保存期限为 6 个月。
自备试剂:样品 RNA。
性能指标:点击了解更多PCR检测试剂盒。
1.试剂盒检测特异性为100%
2. 检测试剂盒重现性为100%
3. 灵敏度可达到103/ml
4. 有效期为6个月
注意事项:
①加入试剂的顺序应*,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。pTA-Luc英文名(EN):1-Pentene,≥99.5%CAS No.:2213-32-3规格(SP):2.5G类别(Key):通用试剂
pTCK303英文名(EN):Diisobutylene,≥90%CAS No.:25167-70-8规格(SP):100ML类别(Key):通用试剂
pTaq英文名(EN):1,2-Di(4-pyridyl)ethylene,≥97%CAS No.:13362-78-2规格(SP):5G类别(Key):通用试剂
ptdTomato-N1英文名(EN):Terpinolene,≥85%CAS No.:586-62-9规格(SP):100ML类别(Key):通用试剂
pBAD His B英文名(EN):2-Methyl-2-butene,≥99%CAS No.:513-35-9规格(SP):25ML类别(Key):通用试剂
pTet-Off英文名(EN):1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene,98%CAS No.:6674-22-2规格(SP):25G类别(Key):通用试剂
pTet-On英文名(EN):trans-1,2-Dichloroethylene,98%CAS No.:156-60-5规格(SP):5G类别(Key):通用试剂
pTet-On advanced英文名(EN):cis-1,2-Dichloroethylene,≥95.0%CAS No.:156-59-2规格(SP):1ML类别(Key):通用试剂
pTet-Rev-Tight英文名(EN):3-Chloro-2-methyl-1-propene,98%CAS No.:563-47-3规格(SP):50ML类别(Key):通用试剂
pTet-Rev-on英文名(EN):4-Chloro-α-methylstyrene,98%CAS No.:1712-70-5规格(SP):5G类别(Key):通用试剂
pTetOne英文名(EN):1-Dodecene,≥99%CAS No.:112-41-4规格(SP):10ML类别(Key):通用试剂
pTet-PLKO-puro英文名(EN):11-trans-Octadecenoic acid,≥99%CAS No.:693-72-1规格(SP):100MG类别(Key):通用试剂
pTf16英文名(EN):1-Octadecene,≥95.0%CAS No.:112-88-9规格(SP):25ML类别(Key):通用试剂
pTH-304-18Z英文名(EN):1-Hexadecene,≥95.0%CAS No.:629-73-2规格(SP):25ML类别(Key):通用试剂
pThio-His A英文名(EN):1-Tetradecene,≥97.0%CAS No.:1120-36-1规格(SP):5ML类别(Key):通用试剂
pTK-Hyg英文名(EN):1,5-Hexadiene,≥95.0%CAS No.:592-42-7规格(SP):25ML类别(Key):通用试剂
pTK-Luc英文名(EN):2,4-Hexadiene, mixture of isomers,90%CAS No.:592-46-1规格(SP):1G类别(Key):通用试剂
pTracer CMV2英文名(EN):1-Hexene,≥99.0%CAS No.:592-41-6规格(SP):25ML类别(Key):通用试剂
中间葡萄球菌PCR检测试剂盒品牌L-甲状腺素 规格:200mg o-Toluenesulfonamide
L-甲状腺素 规格:200mg Ethylhexyl Triazone
L-肾上腺素 规格:1g Xylitol
L-去甲肾上腺素 规格:500mg Inositol
甲状旁腺激素PTH1-84 规格:200mg Tagatose
S-羧甲基-L-半胱氨酸 规格:200mg Ioversol
N-乙酰-L-谷氨酰 规格:1g Tartaric Acid
L-甘-酪二肽 规格:10mg
一水肌酸 规格:125mg Trandolapril
3,5-二-L-甲腺氨酸 规格:200mg Choline Bitartrate
N-(γ-L-谷氨酰)-1-萘 规格:125mg Ramipril
N-(γ-L-谷氨酰)-2-萘 规格:2g Methylpyrrolidone
盐酸-L-白氨酰-2-萘 规格:1.2ml×3ampules
苯甲氧羰酰琥珀酰亚 规格:350mg Cefpodoxime Proxetil
4-氨基马尿酸 规格:100mg Emedastine Difumarate