谷研试剂-ELISA捕获法检测乙型脑炎病毒IgM

实验原理

用elisa试剂盒抗人μ链包被微孔板，以捕获待检血清中IgM，加入乙脑病毒抗原与其特异性IgM结合，再用酶标抗乙脑病毒抗体与抗原结合，加底物显色。

主要试剂与器材

.病毒抗原的制备与纯化：用乙脑病毒高毒株接种乳鼠或幼鼠，濒死前取脑组织，pH9.0硼酸缓冲液配成0%悬液。0000rpm离心30min，取上清液，按-3mg/ml加，置4℃2h6000rpm，将沉淀物加入原病毒悬液/20体积的离散剂STE缓冲液（EDTA 0.029g，NaCl 0.75g，0.05mol/L pH9.0Tris-HCl00ml）充分碾磨，置4℃2h。高速离心，取上清液，按:5000终浓度加入NaN3，用前进行方阵滴定。对照抗原用正常鼠脑同法制备。

2.elisa试剂盒中抗血清吸收：用乙脑病毒株免疫鼠，制备高价免疫血清。每毫升血清加鼠脑干粉0.g，新鲜补体00μl，时时振摇。4℃2h，再置37℃水浴中h（不断振摇）。高速离心，取上清液，以吸收组织抗体。

3.抗血清纯化：将份血清加份生理盐水，在搅拌下滴加2份饱和硫酸铵溶液，于4℃静置2h后，2000rpm离心20min，吸弃上清液，重复上述2-3次。

4.酶标鼠抗乙脑病毒IgG抗体：将上述提纯的抗体IgG组分，用辣根过氧化物酶以过碘酸钠法进行标记。

5.其他：抗人μ链单抗、待检血清或脑脊液、底物溶液（TWB-H2O2）、终止液（2mol/L H2SO4）等。

操作步骤

.包被抗人μ链单抗：用经适当稀释的抗人μ链单克隆抗体包被微孔，每孔00μl，37℃h后4℃2h，洗3次。

2.加样：用含4%羊血清的PBS-T稀释待检血清，作:0和:00两个稀释度。每孔00μl，37℃3h，洗3次。

3.加抗原：用含4%羊血清的PBS-T稀释抗原，每孔00μl。37℃2h后4℃2h，洗3次。

4.加酶标抗体：用含0%羊血清的PBS-T稀释酶标豚鼠抗乙脑病毒抗体，每孔加00μl。37℃2h，洗4次。

5.加底物：加TMB-H2O2底物溶液，每孔00μl，室温20-30min。

6.终止反应：加2mol/L H2SO4，每孔50μl，终止反应。

结果分析

用酶标仪测450nm波长吸光度。P/N≥2.为阳性。