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ELISA试剂盒的基本原理使用时注意事项

发布时间:2022-11-15      点击次数:65

  ELISA试剂盒用纯化的猪(Cortisol)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入猪(Cortisol),再与HRP标记的猪(Cortisol)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪(Cortisol)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中(Cortisol)浓度。

  ELISA试剂盒的注意事项:

  1.ELISA试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡5-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

  2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

  3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,使用排枪加样。

  4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。

  5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

  ELISA试剂盒的基本原理:

  1.使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。

  2.使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。

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