柱式血液RNA-DNAout

柱式血液RNA-DNAout
产品及特点 本产品是北京天恩泽在柱式血液RNAOUT（CAT#：7202）基础上开发的升级产品，采用先裂解红细胞后纯化白细胞，再从中分别提取总RNA和DNA的策略。本产品具有下列特点：
. 本产品可用于血液RNA提取、血液DNA提取以及DNA和RNA双提，充分利用宝贵的血液样品。
2. 无需使用有毒的酚和氯仿，绿色环保。
3. 采取先裂解红细胞的两步法，避免了血红素等对RNA和DNA的污染。
4. RNA直接从白细胞胞浆中提取，*避免了细胞核基因组DNA的污染。
5. 纯度高，RNA的OD260/280均在2.0左右，DNA的OD260/280均在.8-.9左右
6. 产率高，对新鲜血液样品RNA产率一般为5-50 ug/mL，DNA的产率一般在5-8 ug/mL。对冻存血，RNA和DNA产率跟冻存时间密切相关，波动。
7. 与常用的抗凝剂（包括肝素，EDTA，柠檬酸钠，草酸钠）兼容。
8. 得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern杂交等研究。所得的DNA可直接用于PCR、酶切等实验。
9. 如果需要提取细胞核中的RNA前提，或者提取胞浆中线粒体DNA，则不能使用本方法。
规格及成分 成 份 A型
RNA提取 B型
DNA提取 C型
RNA-DNA双提
C型红细胞裂解液 75 mL 75 mL 75 mL
白细胞裂解液 5 mL 5 mL 5 mL
核酸上柱液 50 mL 50 mL 00 mL
离心吸附柱 50套 50套 00套
通用洗柱液 50 mL 50 mL 00 mL
RNA洗脱液 0 mL 无 0 mL
DNA洗脱液2.0 无 0 mL 0 mL
使用手册 份 份 份

运输及保存 常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂 RNase-free离心管。
使用方法 一：红细胞裂解（请提前将白细胞裂解液放置在冰上预冷）
. 在.5 mL塑料离心管中，加入0.75 mL新鲜或解冻后的抗凝全血，再加入等体积（0.75 mL）的C型红细胞裂解液，轻柔颠倒混匀。
2. 4000-5000 g 4℃离心0分钟，弃上清（红色）。
3. 在细胞沉淀中再加入0.75 mL的C型红细胞裂解液，重悬沉淀细胞（由白细胞和残留的红细胞组成）。
4. 4000-5000 g 4℃离心0分钟，弃上清。
5. 在细胞沉淀中再加入0.3 mL冰上预冷的的白细胞裂解液，重悬沉淀细胞（主要由白细胞组成）。
6. 冰上放置5分钟后以裂解白细胞，8000-0000 g 4℃离心8分钟，将上清（含RNA的胞浆）转移到RNase-free的塑料管中，立即进行RNA提取。沉淀（细胞核）可暂时存放在-20℃冰箱，用于后续基因组DNA提取。

二：RNA提取
. 在约0.3 mL含RNA的胞浆液中加入 mL溶液C，充分震荡混匀。
2. 室温放置0分钟。
3. 将混合液分2次转移到离心吸附柱中。每次转移约0.7 mL，然后室温2000-5000 g离心半分钟，弃穿透液，再转移剩下的混合液，再室温2000-5000 g离心半分钟，弃穿透液。
4. 加0.7 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，2000-5000 g室温离心半分钟，弃穿透液。
5. 如果有必要，可以再加0.3 mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。注意：增加此步可以进一步提高RNA的纯度。
6. 室温2000-5000 g离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的后续反应。
7. 将离心吸附柱转移到一个RNase-free的收集管（可用.5 mL的RNase-free塑料离心管替代）中，加入50-00 uL RNA洗脱液，室温放置-2分钟。
8. 2000-5000 g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即用于后续实验或存放于-80℃待用。
9. RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子（BioTechniques，28：44，2000）。
0. RNA产量产率测定：将5-0 μL RNA溶于TE缓冲液中（pH7.5-8.2之间）检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（ OD260的RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度X体积）和产率（RNA产量/组织用量）。人血RNA产率一般为5-20 ug/mL。
. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在2.0左右（具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关），高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

三：基因组DNA提取
2. 在白细胞细胞核沉淀中加入 mL溶液C，用移液枪充分吹打使溶液不粘稠，否则很难穿过吸附柱。
3. 室温放置0分钟。
4. 将混合液分2次转移到离心吸附柱中。每次转移约0.7 mL，然后室温2000-5000 g离心半分钟，弃穿透液，再转移剩下的混合液，再室温2000-5000 g离心半分钟，弃穿透液。
5. 加0.7 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，2000-5000 g室温离心半分钟，弃穿透液。
6. 如果有必要，可以再加0.3 mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。注意：增加此步可以进一步提高DNA的纯度。
7. 室温2000-5000 g离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响DNA的后续反应。
8. 将离心吸附柱转移到一个收集管中（可用.5 mL的塑料离心管替代），加入50-00 uL DNA洗脱液2.0，室温放置-2分钟。
9. 2000-5000 g室温离心半分钟，离心管中溶液即为基因组DNA。
20. 可以在离心吸附柱中再加入30-50 uL DNA洗脱液2.0洗脱基因组DNA。
2. 汇集2次洗脱的基因组DNA，可以立即用于后续实验或存放于-80℃待用。