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内皮素ELISA试剂盒的结构特点和操作步骤

发布时间:2023-08-11      点击次数:182

  内皮素ELISA试剂盒基于酶联免疫吸附法(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,ELISA)原理设计。ELISA是一种常用于检测生物样本中特定分子的定量分析技术。该方法利用特异性抗体与目标分子结合并通过辅助酶的作用产生可测量的信号。

  内皮素ELISA试剂盒.jpg

  内皮素ELISA试剂盒包括以下组分:

  

  1.酶标板:通常为96孔或384孔微孔板,每个孔都涂有预先包被内皮素抗体的表面。

  

  2.内皮素标准品:已知浓度的内皮素溶液,通常提供一系列浓度的标准曲线。

  

  3.内皮素检测抗体:特异性识别和结合内皮素的单克隆或多克隆抗体。

  

  4.辅助酶标记的二抗:与内皮素检测抗体结合,并携带酶标记物(如辣根过氧化物酶,HRP)的抗体。

  

  5.底物液:包含染色底物的溶液,当底物受到酶作用时会发生颜色变化。

  

  内皮素ELISA试剂盒的操作步骤通常为:

  

  1.标准曲线制备:将内皮素标准品按一系列不同浓度加入试验管中,然后依次稀释。每个浓度的标准品都会在酶标板中的不同孔位上进行复制。

  

  2.样本处理:待测样本必须经过预处理,以确保内皮素的释放和可检测性。这可能涉及提取、稀释或纯化等步骤。

  

  3.孔位装样:将标准品、对照和样本分别加入对应的酶标板孔位中。

  

  4.反应:将酶标板在适当的条件下孵育一段时间,使内皮素和抗体发生特异性结合。

  

  5.洗涤:通过洗涤去除未结合的物质,以减少背景干扰。

  

  6.二抗结合:将辅助酶标记的二抗加入孔位中,与已结合的内皮素检测抗体结合形成复合物。

  

  7.再次洗涤:去除未结合的二抗。

  

  8.底物反应:将底物液加入孔位中,辅助酶催化底物发生颜色变化。

  

  9.反应终止:通过添加终止液(如硫酸)停止酶反应。

  

  10.读取结果:使用吸光度分析仪测量孔位中产生的颜色反应强度,并根据标准曲线计算样本中的内皮素浓度。

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