如何正确使用人原纤维蛋白-1酶联免疫试剂盒

人原纤维蛋白-1（FBLN1）酶联免疫试剂盒（ELISA）的正确使用方法，结合实验原理与操作规范进行说明：

‌一、实验前准备‌

‌试剂盒组成‌

包含预包被微孔板、标准品、酶标抗体、显色底物（TMB）、终止液等‌。

保存条件：2-8℃避光保存，避免反复冻融‌。

‌样本处理‌

‌血清/血浆‌：采集后室温静置2小时或4℃过夜，离心取上清（避免溶血）‌。

‌组织匀浆‌：用PBS冲洗后冰上研磨，离心取上清（建议加入蛋白酶抑制剂）‌。

‌二、实验操作流程‌

‌加样与孵育‌

每孔加入100μL标准品或待测样本，37℃孵育90分钟‌。

洗涤3次（每次拍干后加洗涤液，静置2分钟）‌。

‌显色与终止‌

加入酶标抗体，37℃孵育60分钟，洗涤后加TMB显色液避光反应15分钟‌。

每孔加50μL终止液，颜色由蓝变黄后立即读数‌。

‌读数与分析‌

酶标仪450nm波长检测吸光度（OD值），校正波长建议570nm或630nm‌。

通过标准曲线计算样本中FBLN1浓度‌。

‌三、关键注意事项‌

‌质控要求‌

每批次实验需设置阳性对照、阴性对照及无模板对照（NTC）‌。

板内/板间变异系数（CV）应＜5%‌。

‌污染预防‌

分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区）‌。

使用无RNase/DNase耗材，避免交叉污染‌。

‌四、常见问题处理‌

‌假阳性‌：检查洗涤是否彻底或试剂是否过期‌。

‌显色异常‌：确认显色液避光保存及终止液添加顺序‌。