大鼠巩膜成纤维细胞分离自巩膜组织，巩膜是眼球壁的主要组成之一。是眼球纤维膜的后5/6部分。前方联接角膜，后方与视神经的鞘膜延续。巩膜在视神经穿出部附近最厚，愈前愈薄，在肌腱附着处又复增厚。其与角膜交界处，外面有环形的角膜沟，深部有巩膜静脉窦。小儿的巩膜为浅蓝色，成年为白色，老年因脂肪沉着而带黄色。巩膜结构坚韧，有支持和保护眼内组织的作用。成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30 min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6 h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。
产品属性 product attributes
产品名称 大鼠巩膜成纤维细胞
组织来源 巩膜组织
默认种属 SD大鼠，其他咨询
培养基： 大鼠巩膜成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠巩膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测 quality test
实验室分离的大鼠巩膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介 method
实验室分离的大鼠巩膜成纤维细胞采用混合胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来。
操作步骤 operation steps
一、实验前准备
试剂 无菌 PBS、0.25% 胰蛋白酶、Ⅰ 型胶原酶、DMEM 高糖 + 10% FBS + 双抗完全培养基、庆大霉素稀释液。
耗材 显微手术剪、显微镊、眼科器械、培养皿、细胞筛、离心管。
成年 SD 大鼠，术前器械灭菌，操作台紫外照射 30min。
二、取材与预处理
大鼠麻醉处死，眼部 75% 酒精消毒，显微操作下完整摘取双侧眼球。
PBS 浸泡眼球，小心剪开眼球角膜，去除晶状体、视网膜、脉络膜色素层组织，仅保留白色巩膜组织。
巩膜组织用含双抗 PBS 漂洗 5 次，彻底清除色素细胞与残留眼内组织。
三、细胞分离与消化
将巩膜剪切成＜1mm³ 组织碎块，移入离心管加入胶原酶，37℃水浴消化 30min。
再加入等量胰酶，继续消化 15min，期间反复吹打促进细胞脱落。
加入胎牛血清终止消化，细胞悬液过 200 目筛去除组织碎片。
四、纯化与接种培养
滤液 1000×g 离心 6min，弃上清，完全培养基重悬沉淀，离心洗涤 2 次。
接种于培养瓶，37℃5% CO₂培养，24h 后首次换液去除未贴壁死细胞与杂细胞。
细胞呈梭形成纤维样生长，每 2~3 天换液；细胞汇合至 80% 可常规胰酶消化传代。
