大鼠骨骼肌细胞分离自大腿骨骼肌组织；骨骼肌又称横纹肌，肌肉中的一种，约占全身重量的40%。骨骼肌纤维为长柱形的多核细胞，肌膜的外面有基膜紧密贴附。属于横纹肌，横纹肌还包括心肌与内脏横纹肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每块肌肉都是具有一定形态、结构和功能的器官，有丰富的血管、淋巴分布，在躯体神经支配下收缩或舒张，进行随意运动。肌肉可根据共形状、大小、位置、起止点、纤维方向和作用等命名。依形态命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨状肌等。骨骼肌成纤维细胞呈纤维状，不分支，有明显横纹，核很多，且都位于细胞膜下方。骨骼肌间质中有很多成纤维细胞。成纤维细胞是结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30 min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6 h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。
产品属性 product attributes
产品名称 大鼠骨骼肌成纤维细胞
组织来源 大腿骨骼肌组织
默认种属 SD大鼠，其他咨询
培养基： 大鼠骨骼肌成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠骨骼肌成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测 quality test
实验室分离的大鼠骨骼肌成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介 method
实验室分离的大鼠骨骼肌成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来。
操作步骤 operation steps
一、实验前准备
1.试剂配制
完全培养基：DMEM 高糖基础培养基 + 10% 胎牛血清 FBS+1% 双抗（青霉素 - 链霉素 100×）；
消化液：0.25% 胰蛋白酶 - 0.02% EDTA 混合消化液；
冲洗液：无菌 PBS 缓冲液（添加 1% 双抗）；
75% 医用酒精、碘伏。
2.器械与耗材灭菌
手术剪（直剪、弯剪）、镊子两把、培养皿、离心管、细胞培养瓶、移液管、滤网（100 目细胞筛），高压蒸汽灭菌后烘干备用；超净工作台紫外照射 30min 消毒。
3.动物与环境准备
取健康 SPF 级大鼠（出生 1~3 日乳鼠最佳，成鼠亦可）；提前开启细胞培养箱设置 37℃、5% CO₂；全程无菌操作。
二、取材与预处理
1.大鼠处死体表消毒
颈椎脱臼法处死大鼠，浸入 75% 酒精浸泡 5min 充分消毒体表毛发与皮肤，转移至超净台内无菌培养皿中。
2.骨骼肌组织剥离
用无菌镊子撕开后肢腿部皮肤，分离下肢腓肠肌、股四头肌骨骼肌组织，剔除血管、筋膜、脂肪组织，仅保留纯净肌肉块；将剥离组织放入预冷含双抗 PBS 中反复漂洗 3 次，去除血污与杂质。
三、细胞分离与消化
1.组织剪碎
将洗净骨骼肌转移至新无菌培养皿，用眼科剪反复剪切组织至糊状（肉眼无明显大块组织，粒径＜1mm³）。
2.分次胰酶消化
加入足量 0.25% 胰酶消化液浸没组织碎块，37℃水浴摇床消化 15min，每 5min 轻柔吹打一次；第一次消化结束后上清转移至离心管终止消化（加入等量完全培养基）；剩余沉淀补加新胰酶重复消化 2~3 次，合并所有消化上清液。
3.终止消化过滤
全部消化上清经 100 目无菌细胞筛过滤，去除未消化组织残渣，收集滤液至无菌离心管。
四、纯化与接种培养
1.离心弃上清
滤液 1000r/min 室温离心 5min，小心吸弃上层上清液体，保留底部细胞沉淀。
2.差速贴壁纯化（去除肌卫星细胞、肌细胞）
用完全培养基重悬细胞沉淀，接种于培养瓶内，37℃培养箱孵育 40~60min；骨骼肌成纤维细胞贴壁速度远快于肌源性细胞，小心吸出未贴壁悬浮细胞弃去，仅保留瓶底贴壁细胞。
3.传代扩增培养
加入新鲜完全培养基继续培养，每 2~3 天更换一次培养基；细胞汇合度达 80%~90% 时，胰酶常规消化传代，即为纯化大鼠骨骼肌成纤维细胞。
