大鼠角膜上皮细胞分离自眼角膜组织；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。其主要功能如下：①角膜是唯一的无血管的组织，具有透明的特性和合成许多蛋白的功能，分三层细胞层，外层即是上皮细胞；②角膜上皮细胞能参与先天性免疫，能感应病原体存在并发出信号从而激活角膜防御系统；③角膜上皮细胞能高效表达醛脱氢酶。角膜上皮细胞的体外培养对研究角膜的生理学、病理学、免疫学以及分子生物学都是极为重要的手段，常用于研究细胞代谢产物、病毒感染、各种生长因子和药物对细胞生长的影响。
产品属性 product attributes
产品名称 大鼠角膜上皮细胞
简称 CECs
组织来源 眼角膜组织
默认种属 SD大鼠，其他咨询
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠角膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠角膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测 quality test
实验室分离的大鼠角膜上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介 method
实验室分离的大鼠角膜上皮细胞采用混合胶原酶消化结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
操作步骤 operation steps
一、实验前准备
器械：显微手术器械、角膜剪、细胞筛、移液管、六孔板。
试剂：角质细胞专用无血清培养基、PBS、0.25% 胰酶、DispaseⅡ 中性蛋白酶、双抗。
环境：超净台紫外消毒，所有耗材提前高压灭菌烘干。
二、取材与预处理
大鼠麻醉处死后摘取眼球，含双抗 PBS 反复冲洗眼球 3 遍。
沿角膜缘环形剪下完整角膜组织，PBS 漂洗干净表面虹膜、色素杂质。
三、细胞分离与消化
角膜上皮面朝外，浸入 2.4U/mL DispaseⅡ 溶液，4℃冰箱冷消化 12~16h。
取出角膜，显微镊直接撕取表层角膜上皮薄层组织，剪碎至 1mm³ 小组织块。
加入 0.25% 胰酶 37℃消化 8min，培养基终止消化，反复吹打制成单细胞悬液。
四、纯化与接种培养
悬液过 200 目筛，1000rpm 离心 6min，弃上清洗涤细胞沉淀。
无血清上皮培养基重悬细胞，调整细胞密度接种。
培养箱培养，隔天换液，去除悬浮死细胞与少量内皮杂细胞。
