大鼠结肠黏膜上皮细胞分离自结肠组织；结肠在右髂窝内续于盲肠，在第3骶椎平面连接直肠。结肠分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠4部分，大部分固定于腹后壁，结肠的排列酷似英文字母“M”，将小肠包围在内。结肠横切面由内到外依次为：黏膜（上皮层、固有层、黏膜肌层），黏膜下层（疏松结缔组织），肌层（内环形、外纵行两层平滑肌），外膜（纤维膜或浆膜）。肠黏膜上皮细胞是机体内外环境的重要屏障，持续暴露于大量抗原中，也是机体面对病原微生物的第一道防线。因此，肠黏膜上皮细胞除有吸收、分泌和转运等重要生理功能之外，在黏膜先天性和获得性免疫防御机制中也起着重要作用。肠黏膜上皮细胞作为首先接触抗原的细胞，在黏膜免疫反应的起始阶段发挥关键作用，它决定黏膜免疫反应的发生、性质和强度。探讨正常结肠黏膜上皮细胞的分离、体外培养方法，为研究肠黏膜上皮细胞以及与肠黏膜相关疾病建立合适的细胞模型。
产品属性 product attributes
产品名称 大鼠结肠黏膜上皮细胞
组织来源 结肠组织
默认种属 SD大鼠，其他咨询
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠结肠黏膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠结肠黏膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测 quality test
实验室分离的大鼠结肠黏膜上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介 method
实验室分离的大鼠结肠黏膜上皮细胞采用先机械分离法、后胶原酶消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
操作步骤 operation steps
一、实验前准备
器械：解剖剪、弯镊、培养皿、离心管、100 目 + 200 目细胞筛。
试剂：DMEM 高糖培养基、PBS、EDTA 消化液、0.1% 胶原酶 Ⅰ、双抗、D - 葡萄糖。
耗材提前灭菌，配制预冷洗涤 PBS 添加抗生素。
二、取材与预处理
大鼠处死开腹，分离结肠段，结扎两端防止肠内容物渗漏。
剪下结肠组织，预冷 PBS 反复从肠腔内外冲洗，彻底冲净粪便与黏液。
纵向剪开肠管，平铺于培养皿，刮除表面粪便杂质，剪成 2~3cm 肠段。
三、细胞分离与消化
肠段放入 5mM EDTA 预冷溶液，4℃摇床震荡消化 30min，脱落表层上皮。
收集第一次上清，剩余肠组织加入 Ⅰ 型胶原酶 37℃消化 25min。
吹打解离组织，收集细胞悬液，培养基终止消化反应。
四、纯化与接种培养
先后过 100 目、200 目滤网，离心 5min 弃上清，PBS 洗涤两次。
完全培养基重悬细胞，接种于包被多聚赖氨酸的培养板。
培养 6h 首次换液，去除成纤维细胞等杂细胞，后续每 48h 换液。
