大鼠结肠平滑肌细胞分离自结肠组织；结肠在右髂窝内续于盲肠，在第3骶椎平面连接直肠。结肠分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠4部分，大部分固定于腹后壁，结肠的排列酷似英文字母“M”，将小肠包围在内。结肠横切面由内到外依次为：黏膜（上皮层、固有层、黏膜肌层），黏膜下层（疏松结缔组织），肌层（内环形、外纵行两层平滑肌），外膜（纤维膜或浆膜）。结肠平滑肌细胞主要分布于黏膜肌层和肌层的内环形、外纵行平滑肌；结肠运动少而缓慢，对刺激的反应也较迟缓。结肠平滑肌在食物消化与吸收、肠道运动和物质分泌、诱发全身炎症反应以及细胞内信号转导途径等研究中起着重要的作用。结肠平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。结肠平滑肌运动活性受到神经递质、胃肠激素和药物等因素的调节。随着现代胃肠动力学研究的进展，对胃肠运动的研究已从器官、组织水平发展到细胞、分子水平，要求在胃肠道单个平滑肌细胞标本上来完成各种电生理、药理和分子生物学等实验。体外培养细胞，由于影响因素单一，是研究细胞功能以及相应的细胞信号转导机制的基础。
产品属性 product attributes
产品名称 大鼠结肠平滑肌细胞
简称 CSMCs
组织来源 结肠组织
默认种属 SD大鼠，其他咨询
培养基： 大鼠结肠平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠结肠平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测 quality test
实验室分离的大鼠结肠平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介 method
实验室分离的大鼠结肠平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。
操作步骤 operation steps
一、实验前准备
器械：精细解剖器械、组织剪、研钵、细胞筛。
试剂：DMEM/F12、0.2% 胶原酶 Ⅱ、0.1% 胰酶、PBS、胎牛血清、双抗。
提前配制完全培养基，超净台紫外消杀。
二、取材与预处理
取大鼠结肠，冲洗肠内容物后纵向剖开肠壁。
显微镊剥离最内层黏膜上皮层，去除浆膜外层结缔组织，保留中间肌层组织。
将纯肌层组织用预冷 PBS 漂洗 3 次，去除残留黏膜碎屑。
三、细胞分离与消化
剪碎肌层组织至糊状（<1mm³），加入 Ⅱ 型胶原酶 37℃水浴消化 40min。
每 10min 吹打一次，消化结束后加血清培养基终止酶活。
静置 2min 取上层细胞悬液，剩余沉淀补加酶液二次消化 20min，合并悬液。
四、纯化与接种培养
悬液过 200 目筛，1200rpm 离心 5min，洗涤沉淀 2 次。
完全培养基重悬，按适宜密度接种培养瓶。
差速贴壁法纯化：接种 2h 后弃上清更换培养基，去除优先贴壁的成纤维细胞，剩余即为平滑肌细胞。
