大鼠髋臼软骨细胞分离自髋臼软骨组织，髋关节是人体最大、最稳定的关节之一，是典型的球臼关节。髋关节既具有良好的内在稳定性，也具有灵活的活动性。髋臼位于髋骨外侧面中央，呈半球形深凹，直径约30-50 mm，表面覆盖厚约2 mm的透明关节软骨，呈半月形分布。中央是髋臼窝，无软骨覆盖，由哈佛腺充填，可以随关节内压力的增减挤出或者吸入关节液，以维持关节内压力的平衡。髋臼边缘的环形关节盂唇可以加深、加宽髋臼，使髋臼容纳股骨头的大部并处于稳定的位置，加强了髋关节的稳定性。幼稚的关节软骨细胞位于关节软骨组织的表层，单个分布、体积较小、呈椭圆形，长轴与关节软骨表面平行，越向深层的关节软骨细胞体积之间增大呈圆形，细胞核圆形或卵圆形、染色浅，细胞质弱嗜碱性，常见数量不一的脂滴。成熟的关节软骨细胞多2-8个成群分布于关节软骨陷窝内，这些关节软骨细胞由同一个母细胞分裂增殖而成，称为同源细胞群。电镜下，关节软骨细胞有突起和皱褶，细胞质内有大量的粗面内质网和发达的高尔基复合体及少量的线粒体。在组织切片中，关节软骨细胞收缩为不规则形，在软骨囊和细胞之间出现较大的腔隙。
软骨细胞在单层（2D）培养中的体外扩增必然会导致其去分化。软骨细胞会逆转为分化程度较低的细胞类型，原本合成的透明软骨相关蛋白——II型胶原蛋白（COL2）和聚集蛋白聚糖（ACAN），分别被 I 型胶原蛋白（COL1）和多功能蛋白聚糖（VCAN）取代。这些细胞外基质成分是纤维软骨的典型特征，细胞变成纤维软骨与透明软骨的混合物。有研究表明，软骨细胞特异性基因Ⅱ型胶原和蛋白聚糖在P0代细胞高表达，其表达量随传代次数增加而下降。P1、P2、P3、P4、P5代细胞Ⅱ型胶原的mRNA表达量分别为P0代细胞的87%、90%、67%、20%和3%，蛋白聚糖表达量分别是P0代细胞的60%、30%、23%、18%和10%（参考文献：《体外持续传代引起小鼠透明软骨细胞表型和细胞外基质平衡变化的研究》）；细胞形态由椭圆形、圆形、短梭形、多角形，逐步转变为可增殖的长梭形、成纤维样，表现出成纤维细胞样表型。体外培养中，通过水凝胶包封或破坏F-肌动蛋白细胞骨架等方式恢复细胞的圆形三维形态，可在一定程度上恢复软骨细胞表型，3D培养球形细胞形态似乎是软骨细胞表型不可或缺的特征。体外培养的软骨细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。
产品属性 product attributes
产品名称 大鼠髋臼软骨细胞
组织来源 髋臼软骨组织
默认种属 SD大鼠，其他咨询
培养基： 大鼠髋臼软骨细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠髋臼软骨细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测 quality test
实验室分离的大鼠髋臼软骨细胞，P0代经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介 method
实验室分离的大鼠髋臼软骨细胞采用胶原酶联合中性蛋白酶消化制备而来。
操作步骤 operation steps
一、实验前准备
骨科剪、咬骨钳、显微镊；DMEM/F12、Ⅱ 型胶原酶、PBS、双抗、FBS。
选用 4~6 周龄大鼠，器械彻底灭菌。
二、取材与预处理
大鼠处死后剪开髋关节，暴露髋臼关节窝，小心刮取髋臼表面透明软骨组织。
PBS 冲净骨屑与血迹，剔除下方骨组织，仅保留纯白软骨薄片。
将软骨剪切成极小碎粒，预冷 PBS 漂洗 2 次。
三、细胞分离与消化
软骨碎块加入 0.2%Ⅱ 型胶原酶，37℃摇床消化 4~6h。
每 1h 吹打一次，直至软骨基本溶解分散。
血清终止消化，收集细胞悬液。
四、纯化与接种培养
200 目滤网过滤骨残渣，1000rpm 离心 6min，洗涤细胞沉淀。
完全培养基重悬细胞接种培养瓶。
48h 换液去除未贴壁细胞，常规培养扩增。
