大鼠脉络膜微血管内皮细胞分离自眼球脉络膜组织；脉络膜在视网膜和巩膜之间，含有丰富血管和色素细胞，对外力冲击的耐受性较视网膜差，当眼球受到从前面来的外力的冲击作用通过玻璃体传到后极部时，坚硬的巩膜在其外面又有抵抗作用，使脉络膜在内外两种作用夹攻下而发生破裂和出血。脉络膜呈暗褐色，围绕视神经乳头部有照膜，为青绿色带金属光泽的三角形区。脉络膜是眼球中膜的后2/3处的薄膜，由纤维组织、小血管和毛细血管组成，软而薄，棕红色，在巩膜和视网膜之间，续连于睫状体后方。脉络膜的血循环营养视网膜外层，其含有的丰富色素起遮光暗房作用。主要功能是营养视网膜外层及玻璃体，并有遮光作用，使反射的物象清楚。同时对视觉系统起保护作用，对整个视觉神经有调节作用。续连于睫状体后方，含丰富的血管和色素细胞，有营养和遮光作用。
产品属性 product attributes
产品名称 大鼠脉络膜微血管内皮细胞
简称 CMVECs;CMVECs
组织来源 脉络膜组织
默认种属 SD大鼠，其他咨询
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）
培养基： 大鼠脉络膜微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠脉络膜微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测 quality test
实验室分离的大鼠脉络膜微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介 method
实验室分离的大鼠脉络膜微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
操作步骤 operation steps
一、实验前准备
器械：显微镊子、显微剪刀、眼科剪、培养皿、离心管、滤网（200 目 / 400 目）、移液枪套装
试剂：预冷 PBS、DMEM 完全培养基（10% 胎牛血清 + 双抗 + 内皮细胞生长添加剂 ECGS）、0.25% 胰蛋白酶 - EDTA、Ⅱ 型胶原酶、BSA 封闭液
耗材：细胞培养瓶、细胞筛、冻存管、无菌纱布
二、取材与预处理
脱颈处死大鼠，75% 酒精浸泡头部消毒 1min，沿颅中线剪开颅骨，完整剥离眼球。
无菌 PBS 漂洗眼球 3 次，剪开眼球巩膜，剔除视网膜、晶状体，小心剥离脉络膜组织，剪碎至 1mm³ 细小组织块，预冷 PBS 反复漂洗去除血污。
三、细胞分离与消化
组织碎块加入 0.1%Ⅱ 型胶原酶，37℃恒温摇床消化 30~40min，每 10min 轻柔吹打 1 次。
加入含血清完全培养基终止消化，200 目滤网初步过滤去除大块组织残渣。
滤液 1000r/min 离心 5min，弃上清，沉淀用 PBS 重悬洗涤 2 次。
四、纯化与接种培养
细胞悬液铺入明胶提前包被的培养瓶，37℃5% CO₂孵箱差速贴壁 1.5h，吸出上清去除成纤维细胞杂细胞。
上清转移至新包被培养瓶继续培养，每 2d 更换一次内皮专用完全培养基。
细胞汇合度 80% 即可传代，常规胰酶消化传代，可通过 CD31 免疫荧光鉴定内皮纯度。
