大鼠胚胎肢芽间充质干细胞分离自胚胎肢芽；胚胎肢芽存在于两栖类以上的大多数脊椎动物胚胎中，在四肢发生的初期阶段，在身体两侧有呈芽状的突起，内部是中胚层侧板的体壁板垱厚形成，表面有表皮覆盖。在这个中胚层区肢芽迅速伸长，不久，在其前端即见有指的突起。在此时期间，其内部的中胚层分化成软骨、肌肉等。这些分化组织，在将肢芽作分离培养的时候也可以获得。根据对两栖类的有尾类的研究，作为肢原基各部的胚发能力，肢芽物质的大部分是位于背半部，而前半部主要参与基部形成，后半部参与前端的形成。在实验上，即使将肢的原基分成二半，每一半调整好都可形成基本上近于正常形态的肢体，而且肢体各轴的极性和侧性也逐渐决定。间充质干细胞（MSC）是属于中胚层的一类多能干细胞，主要存在于结缔组织和器官间质中，是具有高度自我更新和多向分化潜能的干细胞；这些细胞可以通过分裂维持自身细胞的特性和数量，并在特定条件下转变成为一种或多种构成人体组织或器官的细胞，从而在组织修复等方面发挥积极作用。
产品属性 product attributes
产品名称 大鼠胚胎肢芽间充质干细胞
组织来源 胚胎
默认种属 SD大鼠，其他咨询
培养基： 大鼠胚胎肢芽间充质干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠胚胎肢芽间充质干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测 quality test
实验室分离的大鼠胚胎肢芽间充质干细胞经CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介 method
实验室分离的大鼠胚胎肢芽间充质干细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法制备而来。
操作步骤 operation steps
一、实验前准备
显微解剖套装、细胞筛、离心管、培养皿
试剂：间充质干细胞专用培养基、Ⅰ 型胶原酶、PBS、双抗
二、取材与预处理
取孕 13d 左右大鼠胚胎，剪下四肢肢芽组织，剔除表皮外胚层。
PBS 漂洗肢芽间充质组织，剪碎成细小组织块。
三、细胞分离与消化
胶原酶 37℃消化 35min，间断吹打充分解离间充质组织。
血清终止消化，滤网过滤残渣，离心收集细胞沉淀，洗涤两次。
四、纯化与接种培养
细胞悬液接种培养瓶，采用差速贴壁法纯化间充质干细胞。
每 3 天更换 MSC 完全培养基，细胞呈长梭形漩涡状生长。
细胞汇合 80% 常规传代，可进行多向分化诱导鉴定。
