猪霍乱病毒荧光探针PCR试剂盒采用一步法荧光探针 RT-PCR 技术，特异性检测猪霍乱病毒 RNA，适用于猪组织、血液样本，用于猪重大动物疫病检疫、疫情监测与病毒载量定量。
产品及特点Products and Features
1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据猪霍乱病毒高度保守区设计，不会跟其他病毒 DNA 发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20 μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。
规格及成分Specifications and Ingredients
编号 | 成分 | 规格 |
试剂一 | 2 × Probe qPCR MagicMix | 500 μL |
试剂三 | 荧光 PCR 专用模板稀释液 | 1mL |
试剂二 | qPCR 引物混合液 | 100 μL |
试剂四 | qPCR 探针 | 50 μL |
试剂五 | qPCR 阳性对照(1 × 10E8/μL) | 50 μL |
使用手册 | 1份 |
产品核心特点Core Product Features
高特异性：引物探针靶向病毒专属保守序列，与其他常见水产病原无交叉反应
高灵敏度：可检出微量病毒核酸，能识别早期感染的弱阳性样本
低污染风险：一管式闭管操作，无需后续开盖处理，大幅降低气溶胶污染概率
质控完善：试剂盒配套无传染性的病毒DNA片段作为阳性质控，同时提供阴性对照，结果判读直观可靠
使用方法How to use
Probe qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）：
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2个样品 ，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析 ，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用第 4 号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：
成份 | N+2 个样品管 | PCR 阴性对照管 | 标准曲线 样品管（2-7 管） |
2 × Probe qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10μL |
qPCR 探针 | 1 μL | 1 μL | 各 1μL |
qPCR 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 各 2μL |
N+2 个待测 DNA 模板 | 7 μL | -- | -- |
超纯水 | -- | 7 μL | -- |
第 7 步所得标准曲线样品稀释液（2-7 号） |
-- |
-- | 各 7μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管） |
11. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 95℃ | 3 min |
PCR 反应 40 个循环 | 95℃ | 15 sec |
60℃ | 1 min（采集 FAM 通道的荧光信号） |
数据处理Data Processing
12. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 RNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
13. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。若重复结果 Ct 值小于40，扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性，否则为阴性。
特别提示：
本公司的所有产品，仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
