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产品名称:大鼠脊髓神经干细胞
货号:GOY-01X1407
分类:原代细胞
2.组织来源:脊髓组织
3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶
4.细胞简介:大鼠脊髓神经干细胞分离自脊髓组织;脊髓是细细的管束状的神经结构,位于脊柱的椎管内且被脊椎保护;是源自脑的中枢神经系统延伸部分。中枢神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息。人和脊椎动物中枢神经系统的一部分,在椎管里面,上端连接延髓,两旁发出成对的神经,分布到四肢、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H形(蝴蝶型)灰质区,主要由神经细胞构成;在灰质区周围为白质区,主要由有髓神经纤维组成;脊髓是许多简单反射的中枢。脊髓两旁发出许多成对的神经(称为脊神经)分布到全身皮肤、肌肉和内脏器官。脊髓是周围神经与脑之间的通路,也是许多简单反射活动的低级中枢。按脊神经的出入可把脊髓也分为相应的31节,31对脊神经就是由不同的脊椎发出的。神经干细胞是一类具有分裂潜能和自更新能力的母细胞,它可以通过不对等的分裂方式产生神经组织的各类细胞。需要强调的是,在脑脊髓等所有神经组织中,不同的神经干细胞类型产生的子代细胞种类不同,分布也不同。神经干细胞作为干细胞的一种,它具有其它所有干细胞的基本特征:具有自我维持和自我更新能力,具有多种分化潜能,具有分化为本系统大部分类型细胞的能力,这种自我更新和分化潜能可以维持相当长的时间甚至终生,对损伤和疾病具有反应能力。神经干细胞在疾病、损伤状态下具有增殖、迁移,并向神经细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞分化的能力,已成为神经系统损伤修复和再生研究的热点,体外建立稳定的神经干细胞培养模型是其基础和临床应用的前提。神经干细胞在培养3-4d后,可形成神经球,神经球在培养基中呈悬浮生长。
5.方法简介:公司实验室分离的大鼠脊髓神经干细胞采用消化后差速贴壁,结合神经干细胞专用培养基培养筛选制备而来,总量约为5×10?cells/瓶。
6.质量检测:公司实验室分离的大鼠脊髓神经干细胞经Nestin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
7.培养信息: 培养基 含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等 换液频率 每2-3天换液一次 生长特性 悬浮 细胞形态 球形 传代特性 可传2-3代,Accutase 培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
培养操作:
大鼠脊髓神经干细胞1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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