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产品名称:大鼠髋臼软骨细胞
货号:GOY-01X1417
分类:原代细胞
2.组织来源:软骨组织
3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶
4.细胞简介:大鼠髋臼软骨细胞分离自髋关节软骨组织,髋关节是人体、稳定的关节之一,是典型的球臼关节。髋关节既具有良好的内在稳定性,也具有灵活的活动性。髋臼位于髋骨外侧面,呈半球形深凹,直径约30~50mm,表面覆盖厚约2mm的透明关节软骨,呈半月形分布。是髋臼窝,无软骨覆盖,由哈佛腺充填,可以随关节内压力的增减挤出或者吸入关节液,以维持关节内压力的平衡。髋臼边缘的环形关节盂唇可以加深、加宽髋臼,使髋臼容纳股骨头的大部并处于稳定的位置,加强了髋关节的稳定性。幼稚的关节软骨细胞位于关节软骨组织的表层,单个分布、体积较小、呈椭圆形,长轴与关节软骨表面平行,越向深层的关节软骨细胞体积之间增大呈圆形,细胞核圆形或卵圆形、染色浅,细胞质弱嗜碱性,常见数量不一的脂滴。成熟的关节软骨细胞多2-8个成群分布于关节软骨陷窝内,这些关节软骨细胞由同一个母细胞分裂增殖而成,称为同源细胞群。电镜下,关节软骨细胞有突起和皱褶,细胞质内有大量的粗面内质网和发达的高尔基复合体及少量的线粒体。在组织切片中,关节软骨细胞收缩为不规则形,在软骨囊和细胞之间出现较大的腔隙。体外培养的关节软骨细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。
5.方法简介:公司实验室分离的大鼠髋臼软骨细胞采用胶原酶联合消化制备而来,细胞总量约为5×105cells/瓶。
6.质量检测:公司实验室分离的大鼠髋臼软骨细胞经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
7.培养信息: 培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 换液频率 每2-3天换液一次; 生长特性 贴壁 细胞形态 梭形、多角形 传代特性 可传3代左右 培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
培养操作:
大鼠髋臼软骨细胞1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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