大鼠胚胎干细胞

简要描述：产品可保大鼠胚胎干细胞的生长状态。本产品中已包含大鼠胚胎干细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于大鼠胚胎干细胞的体外培养。本产品仅供进一步科研使用，不得用于诊断、治疗、临床、家庭及其它用途。

产品型号：GOY-01X1421
厂商性质：科研
更新时间：2023-10-24 00:00:00
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大鼠胚胎干细胞

产品名称：大鼠胚胎干细胞

货号：GOY-01X1421

分类：原代细胞

2.组织来源：囊胚

3.产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：大鼠胚胎干细胞分离自囊胚胚胎组织；胚胎干细胞（Embryonic stem cell，ESCs，简称ES、EK或ESC细胞）是早期胚胎（原肠胚期之前）或原始性腺中分离出来的一类细胞，它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。无论在体外还是体内环境，ES细胞都能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型。进一步说，胚胎干细胞（ES细胞）是一种高度未分化细胞。它具有发育的全能性，能分化出成体动物的所有组织和器官，包括生殖细胞。ES细胞具有与早期胚胎细胞相似的形态结构，细胞核大，有一个或几个核仁，胞核中多为常染色质，胞质胞浆少，结构简单。体外培养时，细胞排列紧密，呈集落状生长。用碱性磷酸酶染色，ES细胞呈棕红色，而周围的成纤维细胞呈淡黄色。细胞克隆和周围存在明显界限，形成的克隆细胞彼此界限不清，细胞表面有折光较强的脂状小滴。细胞克隆形态多样，多数呈岛状或巢状。小鼠ES细胞的直径7 微米～18 微米，猪、牛、羊ES细胞的颜色较深，直径12 微米～18微米。胚胎干细胞与普通细胞有显著差别，有其特定的生长特性和特定的标志，例如碱性磷酸酶活性非常高，带有胚胎阶段特异性表面抗原（ Stage- specific embryonic antigens,SSEA），人类胚胎干细胞还带有高分子量的糖蛋白TRA1-60、TRA-1-81等标志，这些特性和标志均可以用于对胚胎干细胞进行鉴定，除此之外，胚胎干细胞还可以在体外永久传代，并保持正常核型。在体外培养体系中加入分化抑制剂如白血病抑制因子（ Leukaemia inhibitory factor,LF）或者在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层（MEF）上培养时，胚胎干细胞都能呈克隆性增殖，长期保持核型正常和稳定，冻存解冻也不影响不分化的特性。另外，胚胎干细胞还表现岀高水平端粒酶活性，目前证明端粒酶与细胞衰老密切相关，多数成熟细胞的端粒酶活性都很低。这些都是胚胎干细胞与成熟细胞不同的重要特点，也可能是其复制生命期限远比体细胞长的原因。

5.方法简介：公司实验室分离的大鼠胚胎干细胞采用分离囊胚组织，去除胚胎透明带、使用特制专用培养基筛选培养，消化传代纯化制备而来，细胞总量约为5×105cells/瓶。

6.质量检测：公司实验室分离的大鼠胚胎干细胞经Oct-4免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息：包被条件明胶（0.1%）培养基含LIF、BMP、Penicillin、Streptomycin等换液频率每2-3天换液一次；生长特性贴壁细胞形态短梭形、多角形传代特性可传5-8代左右消化液 0.025% 培养条件气相：空气，95%；CO2，5%

培养操作：

大鼠胚胎干细胞1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆脱落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

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