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产品名称:单磷酸腺苷脱氨酶3(AMPD3)重组蛋白(Mouse,小鼠)
物种:Mus musculus
(Mouse,小鼠)
英文名称:Recombinant
Adenosine Monophosphate Deaminase 3 (AMPD3)
Erythrocyte-Specific AMP Deaminase; AMP deaminase isoform E
型号:GOY-01D2616
物种 | Mus musculus (Mouse,小鼠) |
来源 | 原核表达 |
宿主 | E.coli |
亚细胞定位 | 分泌 |
预测分子量 | 32.5kDa |
实际分子量 | 30kDa(差异分析请参阅说明书) |
片段与标签 | Leu516~Lys766 with N-terminal His Tag |
缓冲液成份 | 磷酸盐缓冲液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM
DTT, 5% Trehalose和Proclin300.) |
性状 | 冻干粉 |
纯度 | > 90% |
内毒素水平 | <1.0EU/μg(LAL法测定) |
等电点 | 6 |
应用 | Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. |
规格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1.单磷酸腺苷脱氨酶3(AMPD3)重组蛋白(Mouse,小鼠) 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂, 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
2. 每100mg固体组织置于培养皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;
3. 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管,离心10000转/分,4℃离心5 min;
4. 取上清转移至新的预冷的离心管中,即为全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1. 贴壁培养的细胞,吸去培养基后,加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次,每次振摇数次以尽量去除培养液;
2. 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞,将细胞及培养液移至离心管中, 1000转/分离心10 min,再用10mL/150mm培养板的冷PBS,1000转/分离心5 min洗两次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂, 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
4. 细胞洗涤后,转至新的预冷的离心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
5.置于4℃摇床平台上,温和振荡15 min;
6. 14,000rpm,4℃离心15min,取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法)
7. 分装保存于-70℃,避免反复冻融
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