人γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA试剂盒是专门用于定量检测人血清、血浆、细胞上清液及组织匀浆等生物样本中IFI16/p16蛋白含量的科研专用体外检测产品，严禁用于临床诊断。别称：Human interferon-inducible protein 16, IFI16/p16 Elisa Kit
属性参数Characteristic parameters
检测对象：人血清、血浆、细胞上清液、组织匀浆等生物样本中人γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)的蛋白
检测原理：双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA），HRP标记，TMB显色
常规规格：主流分为48孔、96孔两种配置
保存条件：2-8℃避光防潮密封保存
有效期：未拆封状态下6个月
适用范围：仅限科研实验使用，严禁用于临床诊断
实验原理Assay principle：
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本处理及要求Sample pretreatment and requirements：
1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
需要而未提供的试剂和器材Reagents and materials to be used：
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
4.蒸馏水或去离子水
试剂盒组成Component ：
名 称 Label | 组成成分 Kit Components | 数量（48T） Quantity | 数量（96T） Quantity |
酶标板 | 预包被捕获抗体的酶标板 | 8×6条 | 8×12条 |
校准品（10×） | 待测物（1000 nmol/ml） | 1支×100μL | 1支×200μL |
酶标抗体（100×） | 100倍浓缩HRP酶标记的检测抗体 | 1支×50μL | 1支×100μL |
通用稀释液（20×） | 样品/校准品/酶标抗体通用稀释液 | 1支×10mL | 1支×15mL |
浓缩洗液（20×） | 20倍浓缩洗液 | 1支×15mL | 1支×25mL |
显色剂 | TMB、过氧化氢 | 1支×6mL | 1支×10mL |
终止液 | 稀硫酸 | 1支×3mL | 1支×6mL |
经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
回收率Recovery:
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康小鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平的IFI16/p16计算回收率。
样样本类型 | 范范围（%） | 平平均均回收率（%） |
血血清(n=8) | 86-102 | 94 |
血血浆(n=8) | 90-106 | 98 |
细细胞培养上清(n=8) | 94-110 | 102 |
结果的计算Result calculation:
人γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA试剂盒计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑(4-P)曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
注意事项Precautions：
1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用
5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6.在储存和温育时避免强光直接照射。
7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9.不能使用过期产品。
10.如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
