小鼠主动脉外膜成纤维细胞分离自主动脉血管外膜组织；血管外膜是由疏松结缔组织组成，其中含螺旋状或纵向分布的弹性纤维和胶原纤维。血管壁的结缔组织细胞以成纤维细胞为主，当血管受损伤时，成纤维细胞具有修复外膜的能力。有的动脉中膜和外膜的交界处，有密集的弹性纤维组成的外弹性膜。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的血管外膜成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30 min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6 h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。血管外膜成纤维细胞是血管外膜的主要组成细胞之一，其主要生理功能合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。
产品属性 product attributes
产品名称 小鼠主动脉外膜成纤维细胞
组织来源 主动脉组织
默认种属 昆明小鼠，其他咨询
培养基： 小鼠主动脉外膜成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠主动脉外膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测 quality test
实验室分离的小鼠主动脉外膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介 method
实验室分离的小鼠主动脉外膜成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来。
操作步骤 operation steps
复苏前全套准备工作：37℃水浴预热成纤维细胞完全培养基，准备无菌离心管、培养瓶、PBS、胰酶消化液，超净台紫外灭菌半小时，核对冻存管信息，检查试剂无变质浑浊，确认细胞培养箱温度、二氧化碳浓度正常。
冻存细胞水浴解冻操作：从液氮罐取出冻存管，快速放入 37℃水浴，轻柔晃动冻存管加速融化，1‑2min 完成解冻，仅剩微小冰晶，取出后 75% 酒精擦拭管外壁，移入超净工作台，缩短室温暴露时间。
稀释离心去除 DMSO：将冻存管内细胞悬液缓慢滴入装有预温完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，800r/min 离心 6min，离心结束，小心弃去上清液，充分去除冻存保护剂，保护底部细胞沉淀。
重悬单细胞悬液接种：加入成纤维细胞完全培养基，轻柔吹打管底细胞沉淀，制备均匀单细胞悬液，计数后按标准密度接种至 T25 培养瓶，十字摇匀培养瓶，使细胞均匀铺于瓶底。
培养箱静置孵育贴壁：将培养瓶平稳放入 37℃、5% CO₂培养箱静置孵育，24h 内减少挪动，成纤维细胞贴壁较快，稳定环境利于细胞伸展。
换液与细胞形态观察：复苏 24h 后进行换液，吸除旧培养基，去除悬浮死细胞，加入新鲜预热培养基；每 2‑3 天换液，显微镜观察长梭形成纤维细胞形态，监控细菌、真菌污染情况。
传代消化收集细胞：细胞汇合 75‑85% 进行传代，弃培养基，PBS 洗涤细胞，加入胰酶消化，镜下细胞收缩变圆，完全培养基终止消化，收集细胞离心重悬分瓶扩增；该细胞增殖速度快，需及时传代，避免细胞老化。
