柱式土壤DNAout

柱式土壤DNAout
产品及特点 本产品是整合天泽基因土壤DNAOUT（CAT：6070）和柱式腐殖酸清除剂（CAT：6080）两个产品而得的柱式升级产品。它结合了两者的优点，专门用于从各种土壤样品和河海沉积物中提取高质量的DNA的试剂。跟土壤DNAOUT相比它具有下列特点：
. 去污染效果更好，得到的DNA可以直接作为PCR模板或酶切，不需要再进行去腐殖酸处理。
2. 操作过程更加简单快速，整个操作只需要0多分钟，扩容性好。
3. 产量高，每克土壤一般可以提取到5-50 ug DNA，片段长度在20-50 Kb，OD260/280一般都在.8以上。
4. 适合于各种土壤（包括河海沉积物）。
规格及成分 成 份 50次包装
溶液A 25 mL
溶液B 25 mL
溶液C 40 mL
离心吸附柱 50套
通用洗柱液 50 mL
通用洗脱液 0 mL
使用手册 份

运输及保存 常温运输及保存，保存期为一年。
自备试剂 氯仿。
使用方法 . 65℃预热溶液A，待其沉淀溶化后充分混匀，取0.5 mL加入到.5 mL塑料离心管中并放置于65℃待用。
2. 称取0.-0.3 g的土壤，加入到含预热溶液A的离心管中，震荡器上剧烈震荡5-0分钟。如果是扩量操作，可以使用更多土壤和较大离心管。也可以将同一种土壤在较大离心管中震荡处理，然后再分到.5 mL离心管中。注意:不论使用大的还是小的离心管，一定要让管底的土壤震荡起来。
3. 将离心管置于65℃水浴中保温至少5分钟。
4. 2000-5000 g室温离心3分钟，将上清转移到一新离心管中（上清液一般呈淡黄色或深棕色，实际颜色取决于腐殖酸的含量，上清液的体积一般为300-400 µL）。
5. 在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色或淡黄色混浊状。
6. 将离心管冰浴至少5分钟。
7. 2000-5000 g室温离心3分钟，转移上清到新的.5 mL离心管中，上清液颜色将比第4步得到的上清的颜色稍淡，体积在0.7 mL左右。
注意：下面第8-第9步的氯仿抽提操作可以省略，直接进入第0步，但DNA的产量会低50%左右，OD260/280在.7-.8。如果直接进入第0步，则转移的溶液体积不要超过0.6 mL，否则没有空间加溶液C。
8. 加入0.2 mL的氯仿（自备），震荡器上充分振荡30秒混匀。注意:一定要让管底的溶液震荡起来。
9. 2000-5000 g室温离心3分钟，小心转移上清到新离心管中。说明：离心后两相交界面将有白色膜状物，其中有机相部分颜色较深，一般呈淡棕色。上清的颜色取决于土壤中腐殖酸的含量。将上清转移到新的.5 mL离心管时，不要超过0.6 mL，否则没有空间加溶液C。如果有多余的可以弃之不用。
0. 加入.5倍体积的溶液C，上下颠倒30秒混匀。
. 分两次上柱（即先转移一半的混合液到离心吸附柱中，2000-5000 g室温离心半分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中，2000-5000 g室温离心半分钟，弃穿透液）。
2. 加0.7 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，2000-5000 g室温离心半分钟，弃穿透液。
3. 如果有必要，可以再加0.3 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，2000-5000 g室温离心半分钟，弃穿透液。增加一步洗涤能使zui后得到的DNA的纯度稍有提高，但产量稍微有所降低。
4. 2000-5000 g室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会污染DNA。
5. 将离心吸附柱转移到一新的.5 mL塑料离心管中，加入50-00 uL 通用洗脱液。
6. 室温放置离心吸附柱-2分钟。
7. 2000-5000 g室温离心半分钟，离心管中溶液即为DNA样品，可以立即使用或存放于冰箱待用。