使用方法:
一、样品 RNA 的制备
1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意:可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆转录)反应合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系(20 μL 体系)
2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。
3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆转录酶(含 RI),
反应终体积为 20μL。
4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。
5. 70℃保温 10 分钟以终止反应,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用,丌需要纯化。产品名称:链球菌属通用PCR检测试剂盒价格
英文名称:Streptococcus spp.PCR
规格:详见说明书
类别:PCR检测试剂盒
运输:低温、避光、快递免费送货上门。
用途:生化实验,合成实验等试验。
运输及保存:低温运输,-20℃保存, 保存期限为 6 个月。
自备试剂:样品 RNA。
性能指标:点击了解更多PCR检测试剂盒。
1.试剂盒检测特异性为100%
2. 检测试剂盒重现性为100%
3. 灵敏度可达到103/ml
4. 有效期为6个月
注意事项:
①加入试剂的顺序应*,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以最低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。EGTA Solution(EGTA溶液),1M,pH7.4 英文名(EN):NullCAS No.:Null规格(SP):20MG类别(Key):标准品
EGTA Solution(EGTA溶液),1M,pH8.0 英文名(EN):Momordin Ic (≥98%,HPLC)CAS No.:96990-18-0规格(SP):20MG类别(Key):标准品
Elution Buffer英文名(EN):Lycorine chloride (≥98%,HPLC)CAS No.:2188-68-3规格(SP):20MG类别(Key):标准品
Elution Buffer,pH8.0 英文名(EN):Glabridin (≥98%,HPLC)CAS No.:59870-68-7规格(SP):20MG类别(Key):标准品
Ethidium Bromide Solution,10mg/mL 英文名(EN):Aurantio-obtusin (≥98%,HPLC)CAS No.:67979-25-3规格(SP):20MG类别(Key):标准品
Factor Xa Protease Digestion Buffer 英文名(EN):Nuciferine (≥98%,HPLC)CAS No.:475-83-2规格(SP):20MG类别(Key):标准品
FCS Blocking Buffer in PBS 英文名(EN):Biochanin A (≥98%,HPLC)CAS No.:491-80-5规格(SP):20MG类别(Key):标准品
Ferrous Sulfate Solution(硫酸铁溶液),0.5M 英文名(EN):10-Hydroxycamptothecin (≥98%,HPLC)CAS No.:67656-30-8规格(SP):20MG类别(Key):标准品
Formalin Solution in Phosphate Buffer,10% 英文名(EN):Theobromine (,≥98%,HPLC)CAS No.:83-67-0规格(SP):20MG类别(Key):标准品
Formalin-Acetic Acid Solution 英文名(EN):D-Pinitol (≥98%,HPLC)CAS No.:10284-63-6规格(SP):20MG类别(Key):标准品
Formalin-Sodium Acetate Solution英文名(EN):Hederagenin (≥98%,HPLC)CAS No.:465-99-6规格(SP):20MG类别(Key):标准品
Formalin-Zinc Acetate Solution英文名(EN):8-Methoxypsoralen (≥98%,HPLC)CAS No.:298-81-7规格(SP):20MG类别(Key):标准品
Formalin-Zinc Solution 英文名(EN):Peucedanol (≥98%,HPLC)CAS No.:28095-18-3规格(SP):20MG类别(Key):标准品
Galactose Solution(半乳糖溶液),20%(W/V)英文名(EN):5-Methoxypsoralen (≥98%,HPLC)CAS No.:484-20-8规格(SP):20MG类别(Key):标准品
Gelatin Blocking Buffer in PBS 英文名(EN):L-Carnitine inner salt (≥98%,HPLC)CAS No.:541-15-1规格(SP):20MG类别(Key):标准品
Gelatin Blocking Buffer in PBS with azide 英文名(EN):Cyanidin Chloride (≥98%,HPLC)CAS No.:528-58-5规格(SP):5MG类别(Key):标准品
Gelatin Blocking Buffer in TBS 英文名(EN):Ammonium Acetate (98%)CAS No.:631-61-8规格(SP):250G类别(Key):通用试剂
Gelatin Blocking Buffer in TBS with azide 英文名(EN):Zymosan ACAS No.:58856-93-2规格(SP):250MG类别(Key):通用试剂
链球菌属通用PCR检测试剂盒价格尿激酶 规格:100mg
人纤溶酶 规格:150mg Penicillin G Sodium
几丁质酶 规格:200mg Ampicillin
3α羟基类固醇脱酶 规格:125mg Ampicillin Sodium
肌氨酸氧化酶 规格:200mg Cyclomethicone 4
肌酶 规格:200mg Cyclomethicone 5
肌酸酶 规格:200mg Cyclomethicone 6
S-腺苷高半胱氨酸水解酶 规格:20mg
嘌呤核苷磷酸化酶 规格:20mg
腺苷脱氨酶 规格:500mg Malic Acid
甘油-3-磷酸脱酶 规格:200mg Diacetylated Monoglycerides
3-磷酸甘油酸激酶 规格:125mg Monoglycerides
漆酶 规格:25mg
异柠檬酸脱酶 规格:200mg Piroctone Olamine
麦芽糖酶 规格:200mg Astemizole