小鼠浦肯野细胞

简要描述：产品可保小鼠浦肯野细胞的生长状态。本产品中已包含小鼠浦肯野细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于小鼠浦肯野细胞的体外培养。本产品仅供进一步科研使用，不得用于诊断、治疗、临床、家庭及其它用途。

产品型号：GOY-01X1406
厂商性质：科研
更新时间：2023-10-24 00:00:00
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小鼠浦肯野细胞

产品名称：小鼠浦肯野细胞

货号：GOY-01X1406

分类：原代细胞

2.组织来源：小脑组织

3.产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：小鼠浦肯野细胞分离自小脑皮质组织；小脑的表面被覆着一层灰质，叫小脑皮质，小脑皮质分为3层，从表及里分别为分子层、浦肯野细胞层和颗粒细胞层。皮质里含有星状细胞、篮状细胞、浦肯野细胞、高尔基细胞和颗粒细胞等5种神经元。浦肯野细胞发出的轴突组成小脑皮质的传出纤维，终止于小脑白质内的神经核。浦肯野细胞（Purkinje cell）是从小脑皮质发出的能够传出冲动的神经元。人的小脑皮质约有1500万个浦肯野细胞。浦肯野细胞还广泛分布于心室。显著的电生理特点是传导性强，传导速度快，可达4000mm/s。属快反应自律型细胞，具有舒张期自动除极化的性能，因而有自律性，但自律性强度明显低于窦房结P细胞。这类细胞常常平行排列，细胞内电阻低，只有心室细胞的1/3。小脑：浦肯野细胞是小脑皮质中的神经元，细胞体呈梨形，顶端发出2~3条粗大的主树突，向外伸入分子层。主树突沿途分支繁茂，形如展开的、扁薄的扇形，铺展在与小脑叶片长轴垂直的平面上。树突分支上有大量的树突棘，与传入纤维构成广泛的突触联系，接受传入小脑的全部信息。轴突由细胞底部（与主树突相对方向）发出，细长，离开胞体不远便形成有髓神经纤维，向内经颗粒层离开皮质进入白质，组成小脑皮质的传出纤维，终止于小脑内部的神经核团。一个浦肯野细胞的轴突约形成500个终末膨大，约与小脑深部核团的35个神经元形成突触。心脏浦肯野细胞常常平行排列，几个细胞互相以浆膜连接排成一个小束，小束外包绕着基底膜。细胞内含肌原纤维很少，胞浆区内充满糖原颗粒、线粒体和肌浆网，细胞内电阻低，只有心室细胞的1/3。浦肯野细胞内无横管系统，但膜电容比收缩细胞大，可能是由于其闰盘结构广泛而复杂，提供了较大的表面积的缘故。浦肯野细胞闰盘的主要成分是缝隙连接，粒着膜占的比例很少，这些可能是构成浦肯野细胞传导快的形态学基础。

5.方法简介：公司实验室分离的小鼠浦肯野细胞采用消化法结合神经元专用培养基、化学试剂抑制法筛选制备而来，细胞总量约为5×105cells/瓶

6.质量检测：公司实验室分离的小鼠浦肯野细胞经Neph3免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息：包被条件 PLL（0.1mg/ml）培养基含脂质浓缩液、BSA、Monothioglycerol、Transferrin、Penicillin、Streptomycin等换液频率每2-3天换液一次生长特性贴壁细胞形态神经元细胞样传代特性不增殖；不传代培养条件气相：空气，95%；CO2，5%

培养操作：

小鼠浦肯野细胞1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆脱落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

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