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NK-92MI (人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞)

简要描述：NK-92MI (人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞)注意事项该细胞为悬浮细胞，请注意离心收集细胞悬液；请勿直接倒掉细胞培养液。

产品型号：GOY-01X0525　
厂商性质：科研
更新时间：2023-10-24 00:00:00
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产品名称	规格	货号
NK-92MI (人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞)	1×10⁶/T25培养瓶	GOY-01X0525

商品详情：

名称；NK-92MI (人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞) (STR鉴定正确)

别称　NK-92 MI; NK-92 mi; NK92-MI; NK92MI; NK-92 transfected with MFG-Hil2

种属　人类

生长特性　悬浮细胞

细胞形态　淋巴母细胞样

生长培养基　MEMα＋0.2mM Inositol＋0.1mM β-mercaptoethanol＋0.02mM Folic Acid＋12.5% HS＋12.5% FBS＋1% P/S

冻存条件　

冻存液：90% FBS+10% DMSO

温度：液氮

培养条件　

气相：空气，95%；CO2，5%

温度：37℃

推荐传代比例　5×10^5-1×10^6cells/mL

推荐换液频率　2~3次/周

注意事项　该细胞为悬浮细胞，请注意离心收集细胞悬液；请勿直接倒掉细胞培养液。

背景描述　NK-92细胞是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株IL-2依赖型NK细胞株。NK-92MI细胞是转染得到的源自NK-92细胞的IL-2非依赖的NK细胞株。亲本细胞NK-92通过微粒体基因转化法用逆转录病毒MFG-hIL-2载体携带的人IL-2cDNA进行转化。可能由于载体整合到基因组DNA中，转化是稳定的。这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性；铬释放试验显示它能杀死K562细胞和Daudi细胞。NK-92细胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面标记阳性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面标记阴性。其亲本IL-2依赖的细胞株NK-92细胞及另一株同样来源于NK-92细胞株的IL-2非依赖的细胞株NK-92CI都可从ATCC得到。NK-92MI细胞和NK-92CI细胞这两个变种都包含、表达并合成hIL-2cDNA。NK-92MI细胞合成的IL-2水平比NK-92CI高，而亲本细胞不合成表达。1998年9月提交到ATCC的培养物污染了支原体，其后代通过BM细胞周期蛋白处理21天消除支原体。处理后6周，用Hoechst染色、PCR和标准培养测试进行支原体检测，结果都呈阴性。

年龄（性别）　男性，50岁

组织来源　外周血

细胞类型　肿瘤细胞

肿瘤类型　淋巴瘤细胞

生物安全等级　2

细胞培养步骤：

一、NK-92MI (人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞)复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

二、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a）、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

b）、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。

PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。

三、细胞冻存：

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2、添加0.25%消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；

4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃

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