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鼠抗单克隆抗体

简要描述:鼠抗单克隆抗体 Luteinizing Hormone(LH) Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。

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  • 更新时间:2022-11-16 00:00:00
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详细介绍

鼠抗单克隆抗体 Luteinizing Hormone(LH)  Western Blot技术:

495 鼠抗人促甲状腺素单克隆抗体 Thyroid Stimulating Hormone (TSH)
LOP496 鼠抗人金属蛋白酶组织抑制因子单克隆抗体 TIMP-
LOP497 鼠抗人金属蛋白酶组织抑制因子2单克隆抗体 TIMP-2
LOP498 鼠抗人拓扑异构酶Ⅱα单克隆抗体 Topoisomerase II α
LOP499 鼠抗人TRA cP单克隆抗体 TRAcP
LOP500 鼠抗人转化生长因子α单克隆抗体 Transforming Growth Factor α
LOP50 兔抗人转化生长因子β多克隆抗体 Transforming Growth Factor β
LOP502 兔抗人转化生长因子β2多克隆抗体 Transforming Growth Factor β2

鼠抗单克隆抗体 Luteinizing Hormone(LH)LOP503 兔抗人转化生长因子β3多克隆抗体 Transforming Growth Factor β3
LOP504 鼠抗人转谷酰氨酶II单克隆抗体 TransglutaminaseII(TGaseII) 一、 原理

SouthernNorthern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,探针是抗体,显色用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体例如硝#纤维素薄膜上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

二、分类 Luteinizing Hormone(LH) 现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色,体同水平和实验条件的是用*种方法,目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行,操作也比较简单,原理如下二抗用HRP标记:反应底物为过氧化物+鲁米诺,如遇到HRP,即发光,可使胶片曝光,就可洗出条带。

三、 主要试剂

、 丙烯酰胺和NN’-亚甲双丙烯酰胺,应以温热以利于溶解双丙稀酰胺的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和%(w/v)NN’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29gNN-亚甲叉双丙稀酰胺g,加H2O至 00ml储于棕色瓶,4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0,因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月,隔几个月须重新配制。如有沉淀,可以过滤。 Luteinizing Hormone(LH) 2、 十二烷基硫#SDS溶液:0%(w/v)0.gSDSmlH2O去离子水配制,室温保存。

3、 分离胶缓冲液:.5mmol/L Tris-HCl (pH8.8):8.5gTris48mlmol/L HCl 混合,加水稀释到00ml终体积。过滤后40℃保存。

4、 浓缩胶缓冲液:0.5mmol/L Tris-HCl (pH6.8):6.05gTris溶于40mlH2O中,用约48ml mol/L HCl调至pH6.8加水稀释到00ml终体积。过滤后40C保存。这两种缓冲液必须使用Tris碱制备,再用HCL调节PH值,而不用 Tris.CL

5、 TEMED原溶液NNN’N’四甲基乙二胺催化过硫#铵形成自由基而加速两种丙稀酰胺的聚合。PH太低时,聚合反应受到抑制。0%(w/v)过硫#胺溶液。提供两种丙稀酰胺聚合所必须的自由基。去离子水配制数ml,临用前配制.

6、 SDS- PAGE加样缓冲液:pH6.8 0.5mol/L Tris缓冲液8ml,甘油6.4ml0%SDS 2.8ml,巯基乙醇3.2ml0.05%溴酚蓝.6mlH2O 32ml混匀备用。按::2比例与蛋白质样品混合,在沸水终煮3min混匀后再上样,一般为20-25ul,总蛋白量00μg

7、 Tris-甘氨#电泳缓冲液:30.3gTris88g甘氨#0gSDS,用蒸馏水溶解至000ml,得0.25mol/L Tris-.92mol/L甘氨#电极缓冲液。临用前稀释0倍。

8、 转移缓冲液:配制L转移缓冲液,需称取2.9g甘氨#5.8gTris碱、0.37g SDS,并加入200ml甲醇,加水至总量L

9、 丽春红染液储存液:丽春红S 2g ##30g 磺基水杨# 30g 加水至00ml 用时上述储存液稀释0倍即成丽春红S使用液。使用后应予以废弃。

0、 脱脂奶粉5%(w/v)

、 NaN3 0.02% 叠氮钠有毒,戴手套操作,溶于磷#缓冲盐溶液(PBS)

2、 Tris缓冲盐溶液(TBS):20mmol/LTris/HCl(pH7.5)500mmol/LnaCl

3、 Tween20(5)鼠抗人-MMP-9(6)鼠抗人-TIMP-

4、 过氧化物酶标记的第二抗体。

5、 NBT(溶于70%二甲基甲酰胺,75mg/ml)

6、 BCIP(溶于00%二甲基甲酰胺,50mg/ml)

7、 00mmol/LTris-HCl(pH9.5)

8、 00mmol/L NaCl

9、 50mmol/LTris-HCl(pH7.5)5mmol/L EDTA

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