anti-Melamine<<抗三聚氰胺抗体

简要描述：anti-Melamine 抗三聚氰胺抗体经过实践已经发展的相当成熟，在免疫学诊断中的应用也相当广泛。

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更新时间：2023-02-24 00:00:00
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anti-Melamine 抗三聚氰胺抗体动物体内生产单抗的方法迄今为止，通常情况下均采用动物体内生产单抗的方法，鉴于绝大多数动物用杂交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤细胞与同品系的脾细胞融合而得，因此使用的动物当然*BALB/c小鼠。本方法即将杂交瘤细胞接种于小鼠腹腔内，在小鼠腹腔内生长杂交瘤，并产生腹水，因而可得到大量的腹水单抗且抗体浓度很高。anti-Melamine 抗三聚氰胺抗体可见该法操作简便、经济，不过，腹水中常混有小鼠的各种杂蛋白（包括Ig），因此在很多情况下要提纯后才能使用，而且还有污染动物病毒的危险，故而用SPF级小鼠。
A、材料：a.  成年BALB/c小鼠。b.  降植烷（Pristane）或液体石蜡。c.  处于对数生的杂交瘤细胞。
B、方法：a.  腹腔接种降植烷或液体石蜡，每只小鼠0.3-0.5ml。b.  7-0天后腹腔接种用PBS或无血清培养基稀释的杂交瘤细胞，每只小鼠5×05/0.2ml。c.  间隔5天后，每天观察小鼠腹水产生情况，如腹部明显膨大，以手触摸时，皮肤有紧张感，即可用6号针头采集腹水，一般可连续采2-3次，通常每只小鼠可采5-0ml腹水；d.  将腹水离心（2000r/min 5分钟），除去细胞成分和其他的沉淀物，收集上清，测定抗体效价，分装，-70℃冻存备用，或冻干保存。
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（2）  体外培养生产单抗的方法总体上讲，杂交瘤细胞系并不是严格的贴壁依赖细胞（anchorage dependent cell，ADC），因此既可以进行单层细胞培养，又可以进行悬浮培养。杂交瘤细胞的单层细胞培养法是各个实验室zui常用的手段，即将杂交瘤细胞加入培养瓶中，以含0-5%小牛血清的培养基培养，细胞浓度以×06-2×06/ml为佳，然后收集培养上清，其中单抗含量约0-50ug/ml。显然，这种方法制备的单抗量极为有限，无疑是不适用于单抗的大规模生产。要想在体外大量制备单抗，就必须进行杂交瘤细胞的大量（高密度）培养。单位体积内细胞数量越多，细胞存活时间越长，单抗的浓度就越高，产量就越大。anti-Melamine 抗三聚氰胺抗体

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