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anti-Melamine<<抗三聚氰胺抗体

简要描述:anti-Melamine 抗三聚氰胺抗体经过实践已经发展的相当成熟,在免疫学诊断中的应用也相当广泛。

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  • 更新时间:2022-11-16 00:00:00
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anti-Melamine 抗三聚氰胺抗体动物体内生产单抗的方法迄今为止,通常情况下均采用动物体内生产单抗的方法,鉴于绝大多数动物用杂交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤细胞与同品系的脾细胞融合而得,因此使用的动物当然*BALB/c小鼠。本方法即将杂交瘤细胞接种于小鼠腹腔内,在小鼠腹腔内生长杂交瘤,并产生腹水,因而可得到大量的腹水单抗且抗体浓度很高。anti-Melamine 抗三聚氰胺抗体可见该法操作简便、经济,不过,腹水中常混有小鼠的各种杂蛋白(包括Ig),因此在很多情况下要提纯后才能使用,而且还有污染动物病毒的危险,故而用SPF级小鼠。
A、材料:a.  成年BALB/c小鼠。b.  降植烷(Pristane)或液体石蜡。c.  处于对数生的杂交瘤细胞。
B、方法:a.  腹腔接种降植烷或液体石蜡,每只小鼠0.3-0.5ml。b.  7-0天后腹腔接种用PBS或无血清培养基稀释的杂交瘤细胞,每只小鼠5×05/0.2ml。c.  间隔5天后,每天观察小鼠腹水产生情况,如腹部明显膨大,以手触摸时,皮肤有紧张感,即可用6号针头采集腹水,一般可连续采2-3次,通常每只小鼠可采5-0ml腹水;d.  将腹水离心(2000r/min 5分钟),除去细胞成分和其他的沉淀物,收集上清,测定抗体效价,分装,-70℃冻存备用,或冻干保存。
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(2)  体外培养生产单抗的方法总体上讲,杂交瘤细胞系并不是严格的贴壁依赖细胞(anchorage dependent cell,ADC),因此既可以进行单层细胞培养,又可以进行悬浮培养。杂交瘤细胞的单层细胞培养法是各个实验室zui常用的手段,即将杂交瘤细胞加入培养瓶中,以含0-5%小牛血清的培养基培养,细胞浓度以×06-2×06/ml为佳,然后收集培养上清,其中单抗含量约0-50ug/ml。显然,这种方法制备的单抗量极为有限,无疑是不适用于单抗的大规模生产。要想在体外大量制备单抗,就必须进行杂交瘤细胞的大量(高密度)培养。单位体积内细胞数量越多,细胞存活时间越长,单抗的浓度就越高,产量就越大。anti-Melamine 抗三聚氰胺抗体

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