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产品名称 | 规格 | 货号 |
EL4 (小鼠淋巴瘤细胞) | 1×10⁶/T25培养瓶 | GOY-01X0078 |
商品详情：
名称；EL4 (小鼠淋巴瘤细胞) (种属鉴定正确)
别称 EL-4; EL 4; E.L.4
种属 小鼠
生长特性 悬浮细胞
细胞形态 淋巴母细胞样
生长培养基 DMEM＋10%
HS＋1% P/S
冻存条件
冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养条件
气相：空气，95%；CO2，5%
温度：37℃
推荐传代比例 3×10^5-5×10^5cells/mL
推荐换液频率 2~3次/周
注意事项 该细胞为悬浮细胞，请注意离心收集细胞悬液；请勿直接倒掉细胞培养液。
背景描述 EL4细胞是从用9,10-二甲基-1,2-苯并蒽在C57BL小鼠中诱导的淋巴瘤中建立的。EL4细胞能抗0.1mM氢化可的松，对20mcg/ml
PHA敏感。EL4细胞还有一个亚株(EL4.IL-2)可以生成高水平的IL-2。
组织来源 T淋巴细胞；淋巴瘤
细胞类型 肿瘤细胞
肿瘤类型 淋巴瘤细胞
生物安全等级 1
抗原表达情况 H-2b; Thy-1.2
细胞培养步骤：
一、EL4 (小鼠淋巴瘤细胞)复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
二、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a）、 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
b）、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。
三、细胞冻存：
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2、添加0.25%消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；
4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃
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